芍药甘草汤有效部位芍甘多苷对肝损伤的保护作用及分子机制的研究.pdfVIP

病理改变的进一步发展。 有关的作用机理高不明确，从我们正进行的实验来看，可能与其调节Thl／Th2细胞比例m，抑 制EOS的生成活化及EOS向气道粘膜的趋化粘附等因素有关． 芍药甘草汤有效部位芍甘多苷对肝损伤的保护作用 及其分子机制研究 赵军宁王晓东宋军戴瑛邓治文 彭晓华 (四川省中药研究所，成都61041) 摘要：目的研究和观察从传统名方《伤寒论》芍药甘草汤经提取分离纯化的有效部位芍甘多 苷对实验性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法，小鼠四氯化碳急性肝损伤模型模型试验、小鼠 D-氨基半乳糖急性肝损伤模型试验、大鼠CCl4慢性肝损伤(肝纤维化)模型试验、小鼠免疫性肝损 伤的影响(卡介苗加内毒素)模型试验，应用血清生化、常规病理及电镜观察肝脏的酶学及形态学 改变，采用异硫氰酸胍抽提法提取肝组织细胞总RNA，通过体外反转录获得cDNA，再转录并标记成 描进行数据分析，建立上述全部组织的疾病一正常、疾病一给药、正常一给药基因表达差异谱。结 果芍甘多苷灌胃给药对化学性、免疫性等多种急慢性肝损伤均有显著降低转氨酶、减轻肝损伤组 织病理改变作用．透射电镜可见肝组织超微结构尤其是内质网和线粒体形态有明显改善。所检测的 1152条基因中，肝损伤组有51条基因在疾病状态下的表达较正常状态都有很大的变化，表现为表达 过高或过低。我们在世界上首次建立了芍甘多苷对实验性肝损伤的药理基因表达差异谱，并发现芍 甘多苷干预后，有21条基因表达恢复至与一正常状态无显著性差异，其中有ll条基因的表达基本恢 复至正常状态。基因表达的逆转率在3996咀上．结论芍药甘草汤抗肝炎有效组分芍甘多苷具有显 著的保肝降酶作用，减轻肝损伤组织以及超微结构病理改变，可以通过逆转实验性肝损伤基因的过 高和(或)过低表达来实现其肝脏保护作用。 关键词：芍药甘草汤；芍甘多苷；实验性肝损伤：转氨酶；组织病理学：超微结构：基因芯片。 1实验材料 1．1药物 芍甘多苷(芍药甘草汤经提取分离纯化，含芍药总苷30．1％、甘草酸13．15％和总黄酮苷11．45％)； 联苯双酯滴丸(山东省德州制药厂)；复方鳖甲软肝(内蒙古福瑞制药有限责任公司)：益肝灵薄膜 衣片(水飞蓟素，四川志远广和制药有限公司)：健肝乐颗粒(武汉康乐药业有限公司)；甘利欣(甘 草酸二胺，连云港正大天晴制药有限公司) 1．2动物 sD大鼠，一级合格，川实动管第103号，由国家医药局四川抗菌素工业研究所实验动物中心提 供。昆明种小鼠，一级合格，川实动管第92号，由四川省抗菌素研究所实验动物中心提供。C57近 交系小鼠，由华西医科大学实验动物中心提供。NIH小鼠，一级合格，川实动管第117号，由卫生 部成都生物制品研究所实验动物中心提供。豚鼠，一级合格，川实动管第94号，卫生部成都生物制 品研究所实验动物中心提供。 218 I．3试剂 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(四川迈克科技有限公司)；门冬氨酸转移酶(AsT)测定 成都化学试荆厂产品)；D_氨基半乳糖盐酸盐(D-galactosamineHCl，MW=215．46，含量I99％，重 庆医科大学化学教研室提供)；Ethidiumbromide(髓，美国Sigma公司)；cDNASynthesis technologies公司)；Microbio—Spinchromatographycolumns(美国Lifescience公司)：基因 芯片R01(美国Mergen公司，有1152条基因)． 1．4仪器 箱等。 2方法与结果 2．1对小鼠四氧化碳急性肝损伤的影响 2．L1方法“’21： 昆明种小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分成6组，每组10只。设正常对照组和阳性对照组 日推荐剂量的5、15、30倍)．采用等容积不等浓度药液灌胃给药，0．Iml／109体重，每日1次， 20llr眼眶取血，分离血清测定ALT和AST。处死动物，剖取肝脏，称重，取肝左大叶，固定于10％ u 甲醛液中．常规石蜡包埋切片5 m，腿染色，光镜观察。肝损伤组织病理学改变用半定量方式表达， 评分标准见表1。 表1 四氯化碳急性肝损伤组织学评分标准 评分值 病理组织学改变 未见明显病变 肝细胞水肿变性、胞浆疏松