茶树叶绿素合成相关基因克隆及在白叶1号不同白化阶段的表达分析.pdfVIP

作物学报 ACTAAGRONOMICA SINICA 2015，41(2)：240—250 http：／／zwxb．chinacrops．org／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn D0I：10．3724／SP．J．1006．2015．00240 茶树叶绿素合成相关基因克隆及在 白叶 1号不同白化阶段的表达分析 马春雷 1,2 姚明哲 王新超 金基强 ， 马建强 陈 亮 ， 中国农业科学院茶叶研究所 ／国家茶树改良中心 ／农业部茶树生物学与资源利用重点实验室，浙江杭州 310008；。中国农业科学 院研究生院，北京 100081 摘 要：高等植物叶绿素的生物合成对其正常光合作用起关键作用 。本文根据前期芯片杂交结果，采用 RT．PCR 和 RACE技术克隆了 3个茶树叶绿素合成相关基因，分别为谷氨酸．tRNA 还原酶基因(CsGluTR)、叶绿素合酶基因 (CsChlS)、叶绿素酸醋氧化酶基 因(CsCAO)，对应的 GenBank的登录号分别为 HQ660371、HQ660370、HQ660369。 序列分析表明，CsGluTR基因全长2165bp，开放阅读框长 1665bp，编码 554个氨基酸，推测 的蛋 白分子量约为60．6 kD，理论等电点为8．78； 基因全长 1463bp，其中开放阅读框长 1125bp，编码 374个氨基酸，推测 的蛋 白分子 量约为40．5kD，理论等电点为 8．58；CsCAO基因全长 2146bp，其中开放阅读框长 1611bp，编码 536个氨基酸，推测 的蛋白分子量约为60．8kD，理论等电点为8．03。比对分析表明，3个基因编码的氨基酸序列与其他植物中同源基因的 相似性均在 70％以上。利用荧光定量PCR技术检测 3个基因在不同白化阶段的表达，表明CsChlS和CsCAO基因具 有明显的表达协同性，它们在叶片中的表达量与叶片的颜色变化高度 同步；而 CsGluTR在白化叶片和正常叶片中的 表达差异相对较小，同时在新生芽叶转绿过程中最先恢复正常表达水平。说明在 白化叶片中，叶绿素的合成机制受到 较大影响，叶绿素合成受阻导致的叶片内色素类物质含量降低或消失是叶片白化的直接原因。 关键词：茶树：谷氨酸．tRNA还原酶；叶绿素合酶：叶绿素酸醋氧化酶；基因克隆；表达分析 Cloning andExpression ofThreeGenesInvolved in ChlorophyllBiosynthesis atDifferentAlbescentStagesofTeaPlantVariety ‘B‘aiye1’’ MAChun．Lei，，YAOMing．Zhe，WANGXin．Chao，JINJi—Qiang，，MAJian—Qiang，andCHENLiang， LTeaResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalScienceslNationalCenterforTeaImprovement|KeyLaboratoryofTeaBiologyand ResourcesUtilization，MinistryofAgriculture，Hangzhou310008，China；GraduateSchoolofChineseAcademyofAgriculutralSciences，Beijing 100081，China Abstract：Chlorophyllisoneofthemainpigmentsparticipatinginphotosynthesisinplantchloroplasts，anditsbiosynthesisis crucialforhigherplant．Inthisarticle．weclonedandcharacterizedthreeimportantgenesinvolvedinthebiosynthesisofchloro— phyl1whichwereCGluTR．CsChlS,andCsCA0(GenBankaccessionnumberHQ660371，HQ660370．andHQ660369)leadon theresultsofeDNAmicroarrayhybri