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B14破膜剂在生物功能化色谱方法研究中的影响及对策
马文1。2郭琼1屈锋1黄启彬2邓玉林1+
1．北京理工大学生命科学与技术学院，2．防化研究院第四所
生物功能化色谱是在液相色谱中模拟生物膜的表面以及生物环境进行分子间相互作用研
究的一项新技术，在研究中需要进行膜蛋白的人工提取，必然涉及到破膜剂的填加，破膜剂
的作用是使膜蛋白从细胞膜上释放山来，接着在后续的步骤中需要将受体溶液中的破膜剂除
artificial
去——这是因为色谱固定相IAM(immobilizedmembrane)的表面既含疏水组分，
也带有两性电荷，当我们固定化受体后，配体与受体以及受体与IAM表面的相互作用包括疏
水、静电作用和氢键作用等，而一般来讲破膜剂的组成都包含疏水端和亲水端，破膜剂的存
在必然会对受体一配体作用以及受体一I圳作用过程进行干扰，引起配体保留时间的改变。因此
需要将破膜剂除去。根据蛋白和破膜剂本身性质上的差异，可以有多种去除方法。本文尝试
析方法由于时间较长，可能带来活性的较大损失，但去除比较彻底；凝胶过滤方法虽然快捷，
但是由于破膜剂胶束与蛋白形成了复合体，需要将蛋白溶液进行稀释后过滤，因此优选的方
法应该是在最大限度保持活性的基础上最有效的去除所有破膜剂。一4℃下动态透析5h和将蛋
白液稀释10倍凝胶过滤得到较好的结果。
关键词：破膜剂，生物功能化色谱，透析，凝胶过滤
图1：胰岛素存不同柱上的保留时间．缓冲体系为禽
5·mol／L N靠l的
5mol／LEDTA,2mmol／L№C11．10retool／L№Cl的50Ⅲaol／L缓冲体系： EIYrA，2皿ol／Llkcl：．10m=ol／L
Tris 4，检测波长278nm。 50mol／LTrisHCl，pH值为74，检测波长278nm。洗脱速度
HCI，pH值为7
为3ml／min
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