单克隆抗体论文.docVIP

此技术是1975年Kohlor应用细胞杂交 瘤技术， 将致敏的淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤，而产生同源抗体， 因为此 杂交瘤细胞既保持了瘤细胞增生的特性，又 保持了分泌抗体的特性， 能产生无限量的同 源单克隆抗体。这些抗体有相同的结构和较 为均一的理化性质， 能对抗原大分子的决定 簇有较高的分辨能力，特异性强， 所以称之 为生物激光。 ’ 单克隆抗体除有很强韵特异性外， 监可 做为裁体 ； (1)可与毒素联接， 如白 喉类毒素，相思豆毒素与单克隆抗体联接 制成抗体毒索联接物。上海细胞研究所研 制有Meab一毒素联接物治疗肝癌取得初步 疗效。(2)可与药物交联，北京抗生索研 究所将单克隆抗体与争光霉素结合成Meab 一药物联接物， 比单纯药物治疗增效1 2倍． (3)与脂质体联接，形成Meab～脂质体联 接物， 可以运载大量抗癌药分子集中在9中瘸 部位。通过脂质体易于将药物进入肿瘤细胞， 内技挥疗效。(4)Me曲与免疫调节剂联 接。有报导干扰素与抗人成骨癌Me如连接 可在体内增强自然杀伤细胞活性。所以单克 隆抗体可做为生物导弹发挥更大的疗效。 作用机理： 多数认为是一种依赖抗体 的细胞毒作用(ADC,G) ]． 效应细胞可 能是表面携带Fc受体的单核或巨噬细胞。单 克隆抗体杀伤肿瘤效应与其免疫球蛋自的亚 群有关(因效应细胞具有较多的Fc受体。) 与亲和力无关．但与靶细胞所表达韵结合点 的数目有关。1-干扰索由于能增加效应细 胞Fc受体及促进肿瘤抗原表达之能力，所以 能增强杀伤效应。同时单克隆抗体对肿瘤的 杀伤效应取决于效应细胞(单核或巨唑细胞) 与肿瘤细胞之比观因此在肿瘤负荷较小时 应用为好。 、 具体作用为通过融合形成杂交瘤分泌单 克隆抗体， 识别癌细胞上的盹瘤特异抗原， 发生抗原抗体反应， 杀伤癌细胞。和更进一 步将药物，毒素，脂质体交联到单克隆抗体 上， 可以增强对癌细胞的杀伤能力。 1获得抗体的传统方法及其缺点 传统的抗体生产方法是向动物(如马、羊等)体 内反复注射某种抗原，即通过反复感染动物，使动物 产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。如此得 来的抗体产量低、纯度低，且制备的抗体特异性差，难 免含有除所需抗体以外的多种其他抗体。 2单克隆抗体的制备原理 哺乳动物感染病原体(如病毒、细菌等)后，体内 会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌抗体 (这里的B淋巴细胞应理解为效应B细胞，即浆细 胞)，凝聚或杀死这些病原体。动物在免疫反应的过 程中，体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上， 但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体(一个B 淋巴细胞只能针对一种抗原决定簇产生一种特异性 的抗体)。因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆 单一的B淋巴细胞，形成细胞群。B淋巴细胞具有产 生单一抗体的能力，但不能在体外增殖(在体外培养 条件下会很快死亡);骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能 在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因 此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合， 产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性— 既能在体外培养条件下不断增殖，又能产生出某种特 异性的抗体 3单克隆抗体的制备过程 3.IB淋巴细胞及骨髓瘤细胞的获得 给小鼠注射特定的抗原(如羊的红细胞)，使小 鼠产生免疫反应，从产生免疫反应小鼠的脾脏细胞中 得到了抗羊红细胞的抗体，这说明在小鼠的脾脏细胞 中形成了相应的B淋巴细胞。然后从免疫小鼠的脾 脏中分离出B淋巴细胞。这里应明确，脾脏是人和动 物体内最大的淋巴器官，是免疫细胞生成、成熟或集 中分布的场所。提取并培养小鼠的骨髓瘤细胞获得 大量的骨髓瘤细胞。 3.ZB淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合 用灭活的病毒或聚乙二醇、电激等诱导小鼠的骨 髓瘤细胞与脾脏中产生的B淋巴细胞融合，结果得到 3种类型的细胞:未融合的亲本细胞、融合的具有同 种核的细胞、融合的杂交细胞。 3.3杂交细胞的筛选 在具有筛选作用的培养基上培养上述类型的细 胞，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都 会死亡，只有融合的杂交细胞才能生长。该杂交细胞 的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。 3.4杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养 融合后的细胞经选择培养基培养后，能存活的细 胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能 分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来进行 再一次筛选。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板 培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。 然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体(常用酶联免 疫吸附试验法)，那些上清液可与特定抗原结合的培 养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自 单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一 般需进行3次一4次，直至确信每个孔中增殖的细胞 为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细