高浓度氧暴露对N9 小胶质细胞功能的影响.pdfVIP

2012;32(1) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·71 · 基础研究 高浓度氧暴露对N9 小胶质细胞功能的影响 1 2 3 2 1 蒋 朴 ，徐 颖 ，胡良安 ，刘 杨 ，邓世雄 1 3 2 重庆医科大学 基础医学院法医学教研室，附属第一医院，重庆 400016 ；附属儿童医院麻醉科和儿童发育疾 病研究省部共建教育部重点实验室，重庆 400014 摘要：目的探讨常压高浓度氧暴露对N9 小胶质细胞功能的影响。方法 体外培养N9 小胶质细胞，分别在900 ml/L 高浓 度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h 后（1）流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率；（2）DCFH-DA 荧光探针检测活性氧（ROS）含 量的变化；（3）RT-PCR 检测Toll 样受体4（TLR4）mRNA 表达变化；（4）ELISA 检测N9 细胞培养上清中IL- 1β和TNF-α的含 量；（5）免疫荧光化学染色检测TLR4 蛋白的表达变化。结果 流式细胞术结果示，细胞凋亡率在高氧暴露12 h 后明显高于 空气对照组（P0.05），16 h 达高峰（P0.01）；高氧暴露2 h 后，细胞内ROS 含量明显增加，呈一定时间依赖性；TLR4 mRNA 及蛋白表达水平明显高于空气对照组（P0.05）；高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL- 1β含量随暴露时间延长而增加，均在 6 h 开始升高，12~ 16 h 达高峰（P0.05），IL- 1β增高较TNF-α更为明显。结论 高氧暴露后N9 小胶质细胞TLR4 通路激活， 产生大量神经毒性因子（ROS、IL- 1β及TNF-α），细胞凋亡增加。 关键词：N9小胶质细胞；常压高浓度氧；Toll样受体4 ；活性氧；促炎症因子；凋亡 中图分类号：R34 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）01-0071-04 DOI: CNKI:44-1627/R1052.005 /kcms/detail/44.1627.R1052.005.html Effect of hyperoxia exposure on the function of N9 microglia in vitro 1 2 3 2 1 JIANG Pu , XU Ying , HU Liangan , LIU Yang , DENG Shixiong 1Department of Forensic Medicine, College of Basic Medicine, 3 The first affiliated hospital of chongqing medical university, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China; 2Department of Anesthesiology, Key Laboratory of Developmental Diseases in Childhood of Chongqing and Ministry of Education, Childrens Hospital, Chongqing 400014, China Abstract: Objective To observe the effect of normobaric hyperoxia exposure on the functions of N9 microglia and explore the underlying mechanism of hyperoxia-induced immature brain injury. Methods N9 microglial cells were exposed to 900 ml/L O2 for 2, 6, 12, 2