猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7在乳酸菌中的表达及免疫原性分析.pdfVIP

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(11)：1514-1519；4November2008 ISSN0001·6·209；CNll--1995／Q http：／／journalsIim．ac．cn 猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et．Vp7在乳 酸菌中的表达及免疫原性分析 胡静涛，王春风 (吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118) 摘要：【目的】在乳酸菌中表达猪源 A组轮状病毒重组质粒 pW425et—Vp7，并检测其抗原性 ，为进 一 步制备猪轮状病毒乳酸菌疫苗奠定基础 。【方法 】摸索电转化条件 ，将 已构建的重组质粒 pW425et—Vp7转化至 fA基因缺陷型的嗜酸乳杆菌中。筛选阳性克隆，采用SDS．PAGE和Western blot检测其表达情况。并将BALB／c小鼠口服免疫该重组菌，问接 ELISA检测其免疫原性。另外 ， 给免疫后小鼠攻以纯化的猪轮状病毒(蛋 白含量 15mg／mL)，初步检测该重组菌的免疫保护作用。 【结果】Vp7基因在乳酸菌中获得表达 ，大小约40．77kDa，且该蛋白可与猪轮状病毒抗体反应，具 有反应原性。ELISA检测小鼠肠黏膜样品结果显示免疫后小鼠能产生明显的抗轮状病毒SIgA抗体， 表明该重组菌具有较好的免疫原性。且攻毒后，免疫组仅 23％的小鼠发生腹泻，初步证明该重组菌 对猪轮状病毒的攻击具有较好的保护作用。【结论】在乳酸菌中成功地表达了猪轮状病毒Vp7基因， 制备了猪轮状病毒Vp7重组乳酸菌，该重组菌具有较好的抗原性，初步证明其作为疫苗的可行性。 关键词：猪轮状病毒；电转化 ；乳酸菌；表达；免疫原性 中图分类号：R37 文献标识码 ：A 文章编号：0001．6209(2008)11．1514．06 乳酸菌作为动物肠道内正常存在的益生菌具有许 成员之一的乳酸杆菌是保护性抗原基因或免疫调节因子 多益生功效，以其作为表达外源保护性抗原基因的受体 良好的转化或表达系统，以其作为载体表达内源或外源 菌株，就可以将乳酸菌的生物学功能和外源功能抗原基 蛋白，在功能食品、医疗保健等领域具有诱人的前景3【】。 因的特异性免疫相结合¨】。鉴于猪轮状病毒 (Porcine 本研究对电穿孔条件进行摸索和优化后，将已构 Rotavirus，PRV)对养猪业的严重危害，采用基因工程和 建好的重组质粒 pW425et．Vp7电转化到f7lvA基因缺 分子生物学手段研制基因工程乳酸菌，在防治消化道疾 陷型的嗜酸乳杆菌中，经生长功能弥补筛选阳性克 病中的应用潜能是不可估量的。乳酸菌具有使动物肠道 隆I4，5l，通过 SDS．PAGE和Westernblot分析检测在 黏膜底层细胞增加，使免疫细胞吞噬功能增强，加强宿 乳酸菌中的表达情况。将获得表达的重组菌口服免疫 主肠粘膜免疫，诱导SIgA分泌而增强肠道免疫屏障等作 4-6周龄 BALB／c小鼠，采用间接 ELISA检测 SIgA 。 利用一些乳酸菌可在胃肠道、泌尿、生殖系统中 特异性抗体。并对免疫的小鼠攻以猪轮状病毒，初步 黏附存活且抑制病原微生物等特点，开展乳酸菌作为活 检测其免疫保护力 ，为进一步研制绿色环保型猪轮状 菌口服疫苗载体的研究受到了广泛的重视。作为乳酸菌 病毒基因工程乳酸菌疫苗奠定基础。 基金项目：国家 “863计划”(2003AA24l120O2、2006AA10A205，2o07AA1Oz322)；国家 自然科学基金(0200199；吉林省科技厅 项目 通讯作者。Tel／Fax：+86．431E—mail：wangchunfeng@jlau．edu．cn 作者简介：胡静涛(1982一)，女，吉林省长春人，助教，硕士，研究方向为动物病毒学与微生态学。E-mail：hujingtao2004@126．com