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922蟋》2009年学术年会 T060022 血凝抑制试验在实际应用中若干问题的探讨 赵英娜 贾红梅杨平 (山东滨州沃华生物工程有限公司 山东滨州 256606) 摘 要：血凝抑制试验作为一种简便快速的检测方法应用广泛，但实际操作中会受温度、红细胞悬 液配制、结果判定等因素影响试验结果的准确性，本文主要对血凝抑制试验操作的关键点进行阐述。 HI试验在实际应用中首先应注意4单位(HAU)抗原的配制，试验所用抗原在使用前需作血凝(姒)试 验，根据该抗原的血凝价配制4姒u抗原。每次HI试验所用4HAU抗原均要现配现用，配好后还应作4HAU 抗原校对试验，以确定抗原配制是否准确。配制出准确的4HAU抗原是血凝抑制试验成功的首要条件。 其次，还应注意感作温度的控制，感作温度对试验影响较大。温度的高低决定红细胞与病毒的凝集 速度，同时也决定二者的解脱速度。常用感作温度为37C或25℃，温度过低，反应速度慢，观察时间较 长；温度过高，反应速度快，应及时观察结果，防止时间过长导致红细胞与病毒发生解脱。 再次还应注意微量血凝板的清洁，血凝抑制试验中最常见的是跳孔现象(如第3孔和第5孔均出现 血凝抑制，而第4孔却出现凝集)，使结果无法判定。微量血凝板的清洁度对试验结果有很大的影响。 微量血凝板清洁的正确程序为首先用自来水反复冲洗，然后于1％～2％的稀盐酸中浸泡24h以上，再用 自来水反复冲洗2—3次，最后经蒸馏水浸泡24h后37℃烘干备用。 最后注意红细胞悬液的准确配制和HI结果的判定方法，试验证明，不同鸡的红细胞对病毒的敏感性 不同，所以试验时最好选用3—4只鸡的混合红细胞，一般要求用2～6月龄公鸡。为了保证红细胞的稳定 性，在红细胞悬液的制备过程中需掌握好离心速度与时间。进行红细胞悬液配制吸取沉淀的红细胞时， 要在试管最底部吸取进行稀释配制，如随意从沉淀的红细胞上层吸取将会导致配制的红细胞悬液浓度偏 低，因为最后一次离心洗涤红细胞后弃去的PBS液会有二些残留在沉淀的红细胞上层。配好的红细胞悬 液4℃保存备用，一般能保存1周，切忌使用已出现溶血的红细胞进行试验。试验时要设红细胞对照、阳 性血清对照和阴性血清对照。一般来说，当阳性血清对照孔出现凝集抑制5min内判定试验结果较好。判 断结果时，将微量血凝板倾斜45度，孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒的为 凝集抑制孔，红细胞凝集被完全抑制的血清最高稀释度为待检样品的凝集抑制价。 参考文献 【1】1杜平．医用实验病毒学．北京：人民军医出版社，1985：112． [2】中国医学科学院流行病防治研究所．常见病毒实验技术．北京：科学出版社，1978：4647． [3】尼古劳(罗)等墉毒学．北京：科学出版社，1960：528．532(1995．05．02收稿；1996-04-20修回)． 【4】邓小红，蒋小军，吕立新等．鸡醛化红细胞在血凝和血凝抑制试验中的应用田．畜牧与兽医，2005，37(1)：44-45 [5】丁关娥，赵中兴．醛化鸡红细胞作新城疫HA和Ⅲ试验观察阴．中国禽业导刊，1998，4(14)：29． 【6】6张再清．醛化红细胞在减蛋综合征的应用研究叨．甘肃畜牧兽医，2000，(5)：7—8． 血凝抑制试验在实际应用中若干问题的探讨 作者： 赵英娜， 贾红梅， 杨平 作者单位： 山东滨州沃华生物工程有限公司 山东滨州 256606 本文读者也读过(10条) 1. 韩庆安.许玉静.胡自然.吴秀楼.刘红.郑丽.李志民.李同山.杨汉春 2004-2007年河北省规模猪场猪繁殖与呼吸 综合征病毒(PRRSV)变异分析[会议论文]-2009 2. 杭柏林.胡建和.刘丽艳.李杰.HANG Bo-lin.HU Jian-he.LIU Li-yan.LI Jie 影响血凝抑制试验因素的研究进展 [期刊论文]-贵州农业科学2009,37(3) 3. 金海市 提高测定鸡新城疫HI抗体准确性的几点体会[期刊论文]-畜牧与兽医2002,34(9) 4. 许连珍 HA、HI微量法检测鸡群抗体的影响因素 [期刊论文]-中国家禽2006,28(18) 5. 黄嵘 ELISA试验测定需要把握的环节 [期刊论文]-实用医技杂志2004,11(23) 6. 张宝琚.林春丽.王英.韩晓梅 PH值对猪瘟细胞苗抗原效价影响的对比