福尔马林固定肋软骨DNA提取初探.pdfVIP

法医物证学 福尔马林固定肋软骨DNA提取初探 杨 鑫，孙红兵，哈飞，盛清平，马 宏，杨佳 (兰州市公安局刑事科学技术研究所，甘肃兰州730030) 【关键词】法医物证学；福尔马林；DNA提取；QIAgen试剂盒 福尔马林因其保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液的 优势，长期以来在临床检验、医学科学研究中得到广泛应用。但福尔马林在空气中逐渐被氧化呈现的 酸性环境对组织样本DNA双链有着极强烈的破坏性，如何从福尔马林浸泡的组织样本中提取到优质 的DNA，是法医物证鉴定中难点之一。本文使用福尔马林溶液固定后的肋软骨检材，采用不同方法 提取DNA，希望能为选择更佳的提取方法提供参考。 1材料与方法 1．1样品及检材前处理 肋软骨样本取自兰州市公安局提供的在福尔马林溶液中浸泡的1具男性尸体。该尸体浸泡于 2006年，无明显损伤。 000r／min离心 5min，10000r／min离心5min；弃上清，加入lmL超纯水，涡旋震荡3～5rain，10 5min，上述步骤再重复2次。 1．2 DNA提取 Chelex提取法 10％的 000r／min离心5min，备用。 放入98℃恒温水浴中20min，每5min震荡1次；取出涡旋震荡lmin，13 DNA IQ提取法使用IQTM 液涡旋震荡10s，置磁力架上弃上清；加入100pL洗涤液，涡旋震荡lOs，置磁力架上弃上清。重复 中保温10～15min，每5rain震荡1次；取出后涡旋震荡lOs，置磁力架上吸取上清液备用。 1．3 DNA纯化 采用QIAamp@DNA AW2， 000r／min离心1min，弃废液；在纯化柱中加入500mL 100I．LL，涡旋震荡后转入纯化柱，8 8000r／min离心1min、14 000r／min离心2min，收集纯化后的 入50灿洗脱液或纯净水后放人56。C金属浴中保温10～15min；14 DNA产物备用。 1．4 DNA扩增及检测 FSTR 将纯化后的肋软骨DNA提取产物作为模板DNA，用Amp 179 生国洼医堂堡诠生塞璧剑堑盛墨遗丝二全国箜盘遮洼匿堂盔塞速金迨塞篡 IDv 3．2分析各STR基因座数据。 (ABI)上完成。用GeneMapper 2结果与讨论 提取的DNA则未得到分型结果(见图2)。 图1 IQ法提取+QIAamp纯化法肋软骨 图2 Chelex法提取+QIAamp纯化法肋软骨 STR分型图谱 STR分型图谱 Chelex法和IQ法提取福尔马林浸泡的肋软骨模板DNA的原理不同，但均能在一定程度上裂解样 品，释放DNA。而由于渗透入组织中的甲醛和氧化后的甲酸成分具有良好的水溶性，导致两种方法 均无法高效清除DNA提取产物中的甲醛或甲酸残留物。 使用DNAMicro试剂盒的纯化柱对提取的DNA产物进行特效吸附及杂质的分阶段清除，可以有 效去除肋软骨DNA溶液中甲醛、甲酸及其他杂质，从一定程度上解决PCR扩增反应的抑制剂问题， 但纯化结果仍然倚重于DNA提取产物的数量及质量。本文结果也显示，采用Chelex法和IQ法两