C2C12细胞FHL3对不同肌纤维类型MyHC基因表达影响.pdfVIP

·150· 畜牧与兽医2012年第44卷增刊 固醇浓度显著高于海南褐鸡(PO．05)，总蛋白、白蛋白和葡萄糖两品种间无显著差异。结果 表明新疆暗腹雪鸡血液生理生化指标与家鸡之间有不同差异，血液中高血红蛋白浓度可能与其 适应高海拔环境有关。 2．10Isl．1介导瘦素对胰岛素分泌的调节 付锐，陈娟，潘吉荣，李雨姗，罗昊澍，刘佳利，崔胜 (中国农业大学生物学院，农业生物技术国家重点实验室，北京100193) 已有的研究结果证明，瘦素能够调节胰岛素的分泌，转录因子Isl．1亦对胰岛的发育及功能也 具有重要调节作用。但是，转录因子ISl．1是否参与介导胰腺中瘦素对胰岛素的分泌尚不清楚。我 们正是针对这一问题，通过体内、体外实验，同时利用瘦素受体敲除(db／db)和Isl．1诱导敲除 两种小鼠模型，研究了瘦素调节胰岛素分泌的信号转导通路以及Isl．1对瘦素信号通路的介导作用 及相关机理。结果证明瘦素能够明显下调转录因子Isl．1的表达以及胰岛素的分泌；利用Isl．1诱导 敲除小鼠为模型的研究发现，瘦素对胰岛素的下调作用依赖于转录因子Isl．1；利用瘦素受体敲除 小鼠模型(db／db)以及相关信号通路抑制剂发现瘦素通过其长型受体OBRb调节下游J触潲TAT3 信号通路进而影响Isl．1的表达；发现在HEK293T和胰岛B细胞MT-l中瞬时转染Isl．1表达载体后， 与Isl-l共转染的胰岛素基因的启动子活性均有显著增加；利用N1T-1细胞为模型，体外添加胰岛 素，结果显示胰岛素受体和Isl．1的基因表达均显著降低，而瘦素受体的基因表达无明显变化。这 一结果说明在胰岛B细胞中，存在一种反馈调节机制，过量的胰岛素能够通过下调自身受体水平 以降低细胞对胰岛素的敏感性，同时能够通过抑制转录因子Isl．1的表达进而降低胰岛素的合成和 分泌。利用相关的信号通路抑制剂证明胰岛素同样通过JAK／STAT3信号通路影响Isl．1的表达。 上述结果证明了瘦素在胰腺中对转录因子Isl．1表达和胰岛素分泌具有下调作用，且在此过程中 Isl．1是瘦素调节胰岛素分泌的关键因子。 2．11C2C12细胞中FHL3对不同肌纤维类型 MyHC基因表达的影响 徐在雷，李嫒，张云墨 (华中农业大学动物医学院生理生化实验室，湖北武汉430070) 肌肉由肌纤维组成，肌纤维类型在决定肌肉生长和肉质方面起着重要作用，不同纤维类型 调控不同肌纤维类型MyHC基因表达的基因分子机制，对提高瘦肉率好热肉品质具有重要意义。 畜牧与兽医2012年第“卷增刊 ·15l· FHL3蛋白属于LIM超家族的成员，可以通过与重要蛋白相互作用参与调节肌细胞的分化、细胞 骨架的形成以及下游基因的表达。本研究以小鼠成肌细胞为模型，研究干涉FHL3基因和超表达 mRNA水平和蛋白水平表达的变化及其通路研究。具体结过如下： 后不同纤维类型MyHC 1．培养C2C12细胞提取分化0 day、2day、4day、6day细胞的mRNA和蛋白，检测分化不 同时期nlRNA和蛋白表达量的变化，在成肌细胞向肌管分化的过程中，FHL3基因自嗉达量逐渐 减少，而MyHCl基因在肌管形成初期表达量急剧增加，肌管完全形成后又有所下降；MyHC2a 基因随着细胞的分化表达量逐步增加，在肌管形成后表达量最高；MyHC2b和MyHC2x基因也是 随着细胞的分化表达量增加，但分化前期变化较小，到肌管基本形成时期表达量陡增。 量和Western 细胞分化0 day、6day表达量的变化情况。 day、2day、4 3．利用siRNAJ[专染C2C12细胞，转染l day后分化3day，结果显示MyHCI和MyHC2a的表达 细胞，转染2day)舌分化2 达变化较一致。 4．利用siI龇～转染分别分化1 day，结果 day、2day和3day的C2C12细胞，转染后