几种光合速率测定方法的比较以和在实验教学中的应用效果.pdfVIP

2005海峡两岸植物生理与分子生物学教学研讨会论文集 几种光合速率测定方法的比较以及在实验教学中的应用效果一 赵世杰彭 涛高辉远李 滨孟庆伟 (山东农业大学生命科学学院 山东泰安271018) 光合速率的测定是植物光合作用研究的重要手段之一，也是植物生理生态研究中的一个重要指 标，因此，不论是为本、专科生开设的植物生理实验课程还是为研究生开设的植物生理研究技术课 程，测定植物叶片的光合速率都是必不可少的一个实验项目。 植物光合作用可用化学反应式表示为： 排 6C02-I-6H20帮6H1206+602 任何反应物的消耗速率或生成物的增加速率都可以描述这个反应过程的速率。由于植物光合作 用消耗的水分只占植物体含水量的极少部分，水分的消耗量较难测定，因此产生了以下三种主要用 于测定植物叶片光合速率的方法：(1)测定叶片干重的增加速率——改良半叶法；(2)测定02的释 放速率——氧电极法；(3)测定C02的吸收速率——红外线C02气体分析仪法。 目前大多数实验指导书中介绍的植物组织光合速率的测定方法以及科学工作者研究光合作用时 主要应用以上三种方法。本文简要介绍上述三种测定方法的特点及其在植物生理实验教学中的应用 效果。 1．改良半叶法 改良半叶法是以单位时间、单位面积干重的增加量来测定植物叶片光合速率的简易方法，适合 于田间和野外应用。该方法采用烫伤、环割或化学试剂处理等方法杀伤叶柄韧皮部的活细胞，以阻 止叶片的光合产物向外运输，然后将经过基部处理的叶片沿中脉的一侧剪成两半，将其中一半叶片 剪下用湿纱布包裹置于黑暗中，带有中脉的另一半叶片留在植株上于光下进行光合作用。经过4～5 个小时后，剪下留在植株上的一半叶片，并且分别在进行了光、暗处理的叶片上割取同等面积的叶 片于烘箱中杀青后烘至恒重，然后分别称取叶片的重量。根据经过光合作用叶片的重量与在黑暗中 叶片重量的差值、叶面积及光合作用时间计算出光合速率，单位为I．tm01．m-2．S～。 该方法的优点是不需要昂贵的仪器设备，在一定程度上能够反映植物叶片在自然条件下的光合 速率，因此，目前仍有部分院校和科研单位在教学和科研中使用该方法。但是完全阻断叶片光合产 物通过韧皮部向外运输后，积累的光合产物会对叶片的光合作用产生反馈抑制，因此，测定的光合 速率会略低于实际值。由于习毛中的光照变化无常，很难将不同时间的测定结果进行比较。此外，改 良半叶法只能测得植物叶片的光合速率，而无法测得与光合速率有关的其它参数，如气孔导度、蒸 腾速率、细胞间隙C02浓度、C02补偿点、光补偿点等，并且该方法耗时较长(4～5h)，通常在规 定的3学时实验课中，无法完成整个实验过程，如果遇到阴雨天气，则无法进行测定。因此，该方 法用于本科学生的植物生理实验教学有一定的局限性。 2．氧电极法 氧电极法[1,21是通过测定离体叶片、细胞或叶绿体的光合放氧量来表示植物的光合速率。目前常 用的是薄膜氧电极，由镶嵌在绝缘材料上的银极(阳极)和铂极(阴极)构成。电极表面覆以聚四 氟乙烯薄膜，在电极与薄膜之间充以氯化钾溶液作为电解质，当在两极间加0．6～0．8V的极化电压 时，透过薄膜进入氯化钾溶液的溶解氧便在铂极上还原，在银极上发生氧化反应，使电极间产生扩 散电流，电流的大小与透过膜的氧量成正比。电极控制器将电极间产生的电流信号输出，根据测定 时间和叶面积计算出植物组织的光合速率。 该方法的优点是灵敏度高，可以连续监测光合作用或呼吸作用的变化过程；可以控制温度和光 照强度，研究不同温度或不同光照强度下的光合速率变化。该方法不受气孔开闭的影响，因此，可 用于逆境条件引起气孔关闭时光合作用的研究。但是，该方法只能测定离体组织的光合速率，由于 测定时需要将叶片浸在含NaHC03的溶液中，排除了气孔因素对光合作用的影响，因此，测定的光 236 2005海峡两岸植物生理与分子生物学教学研讨会论文集 合速率只反映了植物光合速率的最大潜力，不能反映植物处在自然环境中的实际光合速率。此外， 用氧电极测出的是植物的放氧速率，虽然从光合作用化学反应式来看，光合作用中释放的O：数目等 于同化的C02数目，但实际上，由H20光解产生的电子并不完全用来同化C02，有一部分电子会用 于氮的还原，Mehler反应和光呼吸等过程，所以C0