能量物质在体外对大鼠快肌和慢肌卫星细胞增殖与抗氧化机能研究.pdfVIP

动物医学进展 。2015，36(3)：76—83 ProgressinVeterinaryM edicine 能量物质在体外对大 鼠快肌和慢肌卫星 细胞增殖与抗氧化机能研究 田苗苗 ，朱道立 ，王佳 美，张网星，杨 璐 (南通大学生命科学学院，江苏南通 226019) 摘 要 ：探讨体外能量物质对 SD 大鼠快肌 (胫前肌)与慢肌 (股 中间肌)卫星细胞增殖功 能和 H O 化 学损伤修复研究。采用快 、慢肌卫星细胞传代培养及分离纯化 ，四唑盐 (MTT)比色法、DAPI荧光染色与免 疫荧光抗体检测 。结果表明：①与正常组比较 ，低剂量或中等剂量能量物质对快肌与慢肌卫星细胞有增殖机 能，各剂量作用时间24h48h72h，其 中以ATP溶液 1．25mg／mL，ADP溶液 1．25mg／mL，AMP溶液 2．5mg／mL~4量促进快、慢肌卫星细胞增殖效果最显著 ；② MTT 比色法检测 ATP、ADP及 AMP修 复损伤 快、慢肌卫星细胞明显低于正常组卫星细胞而高于纯 H O 损伤卫星细胞 。且修复效果表现为：ATP溶液 以 1．25mg／mL，ADP溶液为 2．5mg／mL，AMP溶液为2．5mg／mL修复最佳 ；③模 型组 Bax抗体细胞数 102．5±5．7，Bcl-2抗体 细胞 29．6±3．7；ATP、ADP及 AMP溶液保 护组 Bax抗体 细胞 数 67．3±4．9～ 72．8±5．4范围，而Bcl一2抗体细胞在 69．8±5．1～78．5±4．9范围之 内。慢肌股 中间肌卫星细胞各组检测 结果与其类似 。 关键词 ：快肌卫星细胞；慢肌卫星细胞；过氧化氢；ATP；ADP；AMP 中图分类号 ：$852．21 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2015)03—0076—08 近年来骨骼肌受损的发生率越来越高 ，而骨骼 合成代谢 以保证卫星细胞能量。AMPK经 由磷酸 肌卫星细胞 (satellitecell，SC)作为肌组织体外构 化转录因子和调控重新编程代谢基 因表达，AMPK 建的种子[1]，受到大家越来越多的关注和研究。骨 也是全身细胞能量代谢调节 中心。H O 参与和 骼肌卫星细胞是一种未分化的成肌前体细胞 ，1961 R0S氧化应激或损伤 ，产生细胞凋亡率和促凋亡信 年由Mauro从蛙类骨骼肌 中最先分离。干细胞群 号分子 Bax和 caspase一3表达和抗凋亡蛋 白Bcl一2减 必须保留祖细胞 的特点，不断生成扩充维持或修复 低 [5]。目前 ，国内外较少见对快肌 、慢肌卫星细胞研 组织细胞 ，以保证骨骼肌组织 的完整性和功能瞳]。 究 ，我们采用胫前肌 (快肌)卫星细胞和股中间肌 (慢 卫星细胞也属于异质性群体，负责骨骼肌肌 肉再生 肌)卫星细胞作为试验对象，观察 12周龄 SD大 鼠 和成肌卫星干细胞修 复_3]。在未受损伤的肌肉，卫 快 、慢肌卫星细胞体外培养特征与探索 AMP、ADP、 星细胞处于有丝分裂静止期 ，特点是 以配体蛋 白聚 ATP增殖及抗过氧化氢生理生化机制 。 糖一4和 PAX7表达，驻留在基膜和肌纤维细胞膜之 1 材料与方法 间。一旦肌 肉受到损伤 ，卫星细胞立 即通过磷酸化 P38a／3lMAPK诱导 MyoD，然后进入细胞周期循环 1．1 材料 生成为成肌细胞 ，最终经历终末分化和融合 ，以修复 1．1．1 实验 动物 后 12周龄 的 SD (RATTUS 骨骼肌 肉。 NORVEGICUSsprague—dawley)大 鼠12只，雌雄不 AMP激活的蛋 白激酶 (AMPK)经过 能量代谢 拘 ，由南通大学实验动物 中心提供 ，动物生产许可证 供给卫星细胞和全身能量稳态的重要调节器 。在细 号 ：