梨贝壳杉烯氧化酶基因克隆和表达分析.pdfVIP

园 艺 学报201l，38(增刊)：2468 http：／／帆ahs．ac．cn ActaHorticulturaeSinica 26．com E—mail：yuanyixuebao@1 梨贝壳杉烯氧化酶基因克隆及表达分析 欧春青1,2宣利利1’2，姜淑苓1，2，，．王斐1，-，程飞飞1’2，马力1， 李连文1，张静茹1，2 (1中国农业科学院果树研究所，辽宁兴城125100：2农业部果树种质资源利用重点开放实验室，辽宁兴城125100) ‘中矮1号’是中国农业科学院果树研究所选育的我国第一个具有自主知识产权的梨矮化砧木。 其树体矮化紧凑，作中间砧亲和力好，促进嫁接树矮化，早结果，早丰产，品质优，已在生产中推 广栽培，但其致矮的分子机理尚不清楚。本课题组前期对‘中矮1号’的矮生机制做了大量研究， 结果表明‘中矮l号’赤霉素含量低于其它乔化品种。前人在其它植物上的研究也发现植物的矮化 与内源赤霉素、生长素等激素以及它们的相互作用有关。因此，赤霉素在‘中矮l号’体内的合成 可能对其高矮产生影响。贝壳杉烯氧化酶是赤霉素合成过程中的关键酶，‘中矮l号’贝壳杉烯氧化 酶基因的获得及表达分析对研究赤霉素在‘中矮l号’中的合成具有重要意义，并为揭示其矮化的 分子机理提供理论基础。 以‘中矮l号’的叶片为试材，利用RT-PCR和RACE扩增方法，克隆了贝壳杉烯氧化酶基因。 对该基因序列及其编码的蛋白质序列进行了生物信息学分析，并设计特异引物采用实时荧光定量的 方法分析了该基因在‘中矮l号’和正常植株新梢不同生长阶段(生长初期、旺盛生长期、停止生 长期)顶端叶片中的表达差异。 672 克隆的‘中矮l号’贝壳杉烯氧化酶基因全长l 545 因编码区在l～1 YGPYISY，DWRDFFPYL和VFHETLRK几段保守序列，预测其分子量为52．55kD，等电点为7．58。 分别为99％和98％，进化分析表明三者同源。NCBI保守域分析表明获得的贝壳杉烯氧化酶属于细胞 37是跨膜位点区。‘中矮l号’与乔化对照‘早酥’和母本‘锦香’贝壳杉烯氧化酶基因序列比对分 析结果表明，三者仅在核苷酸序列上存在个别碱基差异，氨基酸序列完全一致。该基因在上述3个梨 品种中的表达分析结果表明，新梢生长初期的表达强弱表现为‘中矮l号’‘早酥’‘锦香’，新 梢生长中期到新梢停长期间，‘中矮l号’和‘锦香’的表达量呈逐渐上升趋势，‘早酥’则表现为逐 渐下降的趋势，期间各品种的表达量各有高低，无明显规律，因此，该基因的表达强弱是否与‘中 矮l号’自身矮化相关，还需要做进一步研究证明。 关键词：梨；贝壳杉烯氧化酶；表达；矮化 中图分类号：S661．2 文献标识码：A 文章编号：0513．353X(2011)S-2468-01 收稿日期：201l一0r7—25 基盒项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项；农业科技成果转化资金项日(2010G ‘通信作者(K-maih ochunqing国163．嘲：Tel：0429-3598456)