家族性高胆固醇血症患儿治疗随访和候选基因定位研究.pdfVIP

家族性高胆固醇皿症患儿治疗随访及候选基因定位研究 【中文摘要】 家族性高胆固醇血症(FH)是最为常见且最为严重的单基因代谢性遗传病：FH杂合子患者动脉粥样硬化(As)较正 常人群进展快100倍；FH纯合子患者在幼年发病，治疗较为困难。多数在20岁前死于冠心病。因此FH是As和早发冠心病的 最重要危险因素，加强对FH临床与基础研究不但具有现实意义。更对未来的基因研究有重要意义。目前我国临床确诊的 FH患者多数得不到明确的基因诊断，尚无较可靠的治疗方案。 目的 为深入探索FH患JLII矗i床表型和治疗特点，以及导致胆固醇水平增高的遗传机制，本课题对2例FH纯合子患儿进行临床 研究和治疗随访；采用核苷酸测序筛查已知致病基因，采用全基因组扫描单核苷酸多态性(SNP)一单倍体连锁分析定位致 病染色体候选区域，采用最新的外显子组重测序结合生物信息学方法定位新候选致病基因，并在家系成员中验证。本课题 为FH患儿的病症管理和定位新基因积累经验，并揭示导致胆固醇增高的新分子遗传学机制。 方法 1．对2个河南汉族FH家系先证者进行病史询问、临床体检、生化检测及心脏／；JC．．IfR管超声检查，结合家系成员发病情况 分析结果，根据陈在嘉主编的《临床冠心病学》和美国诊断标准明确临床诊断，初步确定遗传模式； 2．对2家系FH纯合子患儿给予胆固醇合成抑制剂和吸收抑制剂等药物联合治疗并随访； B100和PSCK9，采用 3．提取两家系核心成员基因组DNA(gDNA)，扩增导致FH显性遗传模式的基因LDL-K、apo PCK-SSCP联合核苷酸测序方法，确定候选致病基因位点； lnfiniumHuman 4．如此方法未发现致病基因，则提取家系成员gDNA，制备Illumina Linkage-12芯片。采用高通量测序 平台(1llumina 2．1和Genehunter2．1进行参数及非参数 BeadArray)进行全基因组SNP单倍体扫描，应用连锁分析软件Linkage 连锁分析，定位候选基因最小染色体范围； Enrichment 5．进一步采用最新的外显子组捕获技术(SureSelect Cell测序芯 Target System)构建外显子文库，制备Flow 片。采用最新的高通量测序平台(Illumina2000)对核心家系成员进行外显子组捕获重测序；继以NCBI发布的最新 HiSeq ToolsVCF 使用Sam 及其父母共有的无义突变(NS)、剪切位点突变(ss)和编码区插入缺失突变(I)基因，最终确定候选致病基因。 结果 1．河南I号和II号家系先证者胆固醇水平极度增高，分别为19．79和21．23mmol／L，合并多发性黄瘤病和动脉舡表现，可 FH杂合子患者；两家系具有常染色体显性遗传模式； 2．随访结果显示：联合降脂治疗较为安全；治疗后河南I号家系先证者胆固醇水平下降27％。河南II号家系先证者胆固 醇下降不明显为6％，两先证者冠脉及大血管舡改变随年龄增长而进展； B100和PCSK9基因突变；(2) Q12x)；核心家系成员测序验证发现先证者父亲同样存在该突变；I号家系成员未发现apo B100和PCSK9任何致病性突变； 阿南l圬家系先证者未发现导致FH显性遗传模式基因LDLR、apo №基因组SNP扣描单倍体连锁分析确定了与河南II号家系疾病关联的2个全新候选区域。分别在第3号和21号染色体： )q25．1-26．1、t‰磊2，453。376—165．643，332bp)长约13．2 Mb。参数分析LODS为2．70．非参数分析NPL值8．86； (44．363。322—48．12鲫确峪bp)长约4．3