抗p21ras单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建、筛选和鉴定.pdfVIP

会议交流 中华医学会病理学分会第十七次学术会议暨首届中国病理年会论文汇编 C．198 大小均为21KD即P21ras蛋白，作为重要的分子 有显著鞋钉样特征的甲状腺乳头状癌一一种 开关参与调控细胞的增生、生长、分化及凋亡， 侵袭性／中等分化的甲状腺乳头状癌新变型：病 并在肿瘤的发生和发展中起重要生物学作用，针 例报道及文献复习 对ras蛋白信号通路的靶向治疗目前也成为肿 瘤治疗学研究热点。自从1982年第一株抗 沈文艳1，滕晓东1 1嘉兴市第二医院310003 立以来，国外研究人员己开发出多株抗P21ras 2浙江大学附属第一医院310003 单克隆抗体杂交瘤细胞株(Y13—258、YA6—172、 目的探讨有鞋钉特征的甲状腺乳头状癌的临床 以及在此基础上利用基因工程技术建立的抗 病理学特点。 ‘P21ras小分子抗体(ScFv)，体外试验显示出 方法收集3例有显著鞋钉样特征的甲状腺乳头 良好的抗肿瘤活性。同时研究人员利用这些单克 状癌，分析其临床特点，观察病理组织学形态特 隆抗体广泛研究了ras蛋白的结构、功能及其在 征及免疫表型特征，并复习相关文献。 肿瘤发生、发展中的作用机制。然而，国内对 结果临床特点：3例患者中男性2例，女性l ras基因、ras蛋白的结构、功能研究报道较少， 例，平均年龄36．0岁，均以颈部肿块为首发症 对抗P21ras抗体的研究尚未见报道。本课题利 状。病理检查： (1)大体检查：3例肿瘤平仅用淋巴细胞杂交瘤技术制备5一lO株高度特异 大小2．7cm(0．9cm到4．Ocm)，(2)镜下观察：性、高效价的抗广谱P21ras单克隆抗体杂交瘤 肿瘤细胞呈乳头状排列，乳头含有纤维血管轴 细胞，为进一步构建抗P21ras单链抗体奠定理 心，细胞核／浆比增高，核位于细胞顶部，表面 论和实践基础。 凸起，形成“鞋钉”样外观。其中1例乳头轴心 方法本研究用H-ras基因CDS区全序列表达产 间质内有淋巴细胞浸润，间质可见砂砾体形成。 物--P21ras-H蛋白经复性后反复4次注射免疫 l例原发灶中为经典甲状腺乳头状癌形态，但在 Balb／c小鼠后，取其脾脏B淋巴细胞与SP2／O 淋巴结转移灶中出现了鞋钉结构。 免疫组织化 细胞融合；经HAT选择性培养液的选择性培养； in、TTF一1、CKl9、HB~fE—l、杂交瘤细胞的克隆化和亚克隆化；间接ELISA 学：Thyroglobul Galectin-3、EMA、b-catenin均为阳性表达，2法筛选，最终建立13株抗P21ras单克隆抗体杂 交瘤细胞株，同时对13株杂交瘤细胞进行染色 例表达E-cadherin，l例表达p53和ki67(5％)。 结论有鞋钉特征的甲状腺乳头状癌是一种侵袭 体核型分析、应用免疫层析法、间接ELtSA法、 性／中等分化的甲状腺乳头状癌新变型，通常要 依据病理组织学、免疫组化及临床特征进行证 分别鉴定单克隆抗体的类／亚类、单克隆抗体的 实。 效价、特异性及敏感性等。 结果通过淋巴细胞杂交瘤技术最终获得13株抗 P21ras单克隆抗体杂交瘤细胞，其中1l株杂交 C．199 瘤细胞产生的单克隆抗体与P21ras--H、N、K 三种蛋白均有交叉反应，证明该抗体是针对三种 抗p21ras单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建、筛 选及鉴定