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极低频磁场对NF.KB转录因子的激活作用
周继亮姚耿东
(浙江大学医学院微波研究室,杭州310006)
摘要极低频磁场(ELF.MF)生物学效应及其机理的研究已成为国际上生物电磁学领域
的热点.本研究测定50Hz的ELF.MF辐照HL.60细胞前后NF-r,B结合活性及其上游调控
蛋白It,Bet、p的变化,分析NF.KB转录因子复合物的组成,并探讨50Hz极低频磁场对NF.,cB
信号通路的影响.实验结果表明0.1
mT磁场辐照10分钟时It,Bet、p即开始降解,并且分别
在30分钟、l小时时降解最为明显;凝胶电泳迁移率变化分析(EMSA)结果表明辐照30分
钟时HL.60核蛋白与NF.r.B特异序列结合增强最明显,进一步研究显示NF-lcB/DNA复合
物主要由psO/p65异二聚体和psO/p50同源二聚体两种形式组成,并且推测极低频磁场辐照
可能通过PKC通路傲活NF.r,B.研究结果表明低强度极低频磁场辐照HL.60细胞可傲活
NF.r,B转录因子,从而可能导致基因转录的改变.
关键词 极低频磁场NF-lcB
licBoc、13
由于电力事业的高速发展和各种电器设备的使用,人们暴露在生活和工作环境中强度
小于lmT频率为50 low field,ELF.MF)
Hz的极低频磁场(extremelyfrequency.magnetic
的机会日益增加.自欧洲80年代流行病学调查结果显示低强度极低频磁场的长期暴露可
能与多种肿瘤发生密切相关以来,对ELF.MF生物学效应及其机理的研究已成为国际上生
物电磁学领域的热点IlJ.虽然目前对ELF.MF产生生物学效应的具体机制不甚明了,大量
实验数据表明ELF.MF是通过影响细胞信号转导通路引起的【21.
B,NF.,(B)是指能与某些基因的增强子上1cB位点结合并启动、促
核因子1cB(NF.kappa
进相应基因转录的蛋白质分子.它广泛存在各种细胞类型中,参与多种基因表达的调控,
影响着细胞的生长、分化、凋亡、癌变和个体发育等多种生物学功能.NF.r.B是一个大的
转录因子家族,包括NF.rBl(p50及其前体分子p105),p65/RelA、NF-KB2(p52及其前体
NF-rB滞留于胞浆中.当细胞受外界相关刺激时11cB被磷酸化和泛素化,即可被蛋白酶小
体复合物降解,从而使NF.rB释放出来并转位至核,启动基因转录.多种胞外信号如细胞
因子、自由基和紫外线等可诱导Il(B的磷酸化、泛素化I引.
由于机体或细胞受磁场辐照后产生各种生物学效应必然涉及基因的转录变化,但目前
大多数的电磁生物学效应的研究仅限于对某一单个基因的表达改变进行检测,很少有基因
转录机制方面的研究报道【4J.NF.rB作为一个关键的细胞转录因子,低强度ELF.MF辐照
是否会激活NF.rd3通路,从而引起基因转录的变化呢?人前髓样白血病细胞系HL-60细胞
由于对外界刺傲敏感和易于培养等特点是研究ELF—MF与白血病发生关系的良好模型.本
研究拟测定50Hz,0.1mT强度的ELF.MF辐照HL一60细胞前后NF.IcB结合活性及调控其
活化的蛋白Ird30【.、D的变化,分析NF.KB转录因子复合物的组成,探讨50Hz极低频磁场
对NF.KB信号通路的影响,从而阐明低强度极低频磁场对基因转录影响的可能机制,进一
步认识磁场生物学效应的作用机理,为磁场的防护及卫生标准的制订提供理论基础.
1材料和方法
(1)细胞培养、分组及辐照处理.人前髓样白血病细胞系HL一60细胞购自American
Culture 1640培养基、5%C02及37℃条
Type Collection(ATCC).在含10%胎牛血清的RPMI
件下常规培养.更换新鲜培液后12小时将处于对数生长期的细胞按2.0×106,ml的密度分组
|之■
辐照处理.磁场辐照系统置于细胞培养箱内,主要由一对边长36cm、高度8cm、168匝的
Helmholtz线圈,一只等长等高、
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