毛细管区带电泳分析阿片受体和抗独特型抗羟甲芬太尼抗体.pdfVIP

毛细管区带电泳分析阿片受体和 抗独特型抗羟甲芬太尼抗体 张可佳 周德和 顾 群 徐修容 （中国科学院上海药物研究所 上海 200031） 提要 应用毛细管区带电泳 C（ZE）分析测定阿片受体、抗独特型抗羟甲芬太尼抗体等生物大分子样品。熔融石 英毛细管柱为60cm×100mi.d.从（进样到检测器长度为50cm），以硼砂-氢氧化钾为缓冲液。结果表明缓冲液 的pH影响CZE对阿片受体的分析，当pH为9.0时分析效果最理想，重现性良好，测得的两个主峰与同批样品 进行SDS分析得到的两个条带相符。用CZE分析抗独特型抗羟甲芬太尼抗体 （IgG），表明用ProteinA- Sepharose亲和色谱分离得到部分纯化的Ig，迁移时间不同于对照豚鼠的IgG。 关键词 毛细管区带电泳，阿片受体，抗独特型抗羟甲芬太尼抗体 样品：1)二步纯化法纯化的 -阿片受体；2)豚鼠抗－ 1 前 言 Id抗-OMF抗血清和豚鼠抗-Id抗-OMF的IgG；3) 长期以来，对阿片受体的研究一直是神经生物 对照豚鼠血清的IgG。对于豚鼠抗-Id抗-OMF的 学中一个极其活跃的领域。为了阐明阿片受体与阿 IgG等样品的分析希望达到纯度鉴定的目的。 片类配基相互作用的特征以及受体结合配基后细胞 内发挥各种效应的分子机制，需要对受体进行分离 纯化。王峰等[]曾报道用三齿草藤凝集素 V（BL）和 琥珀酰吗啡为亲和色谱配基的二步色谱法纯化了大 鼠脑阿片受体。近年来我们用一个新的高选择性的 -阿片受体激动剂羟甲芬太尼[2]o（hmefentanyl， OMF）作为亲和色谱配基，与VBL色谱柱合用，进 步二步纯化，以大鼠脑匀浆P2部分的digitonin萃取 液中纯化，鉴定得到 -阿片受体[3]。同时还制备了豚 鼠抗独特型抗（-Id）抗羟甲芬太尼抗体，作为研究阿 片受体的探针，成功地用来识别与结合 阿片受 体[3，并用ProteinA-Agarose色谱柱从豚鼠抗-Id 抗-OMF抗血清中纯化了豚鼠抗-Id抗-OMF抗体 (IgG)，以探索用免疫素和色谱进一步分离纯化 - 阿片受体。 阿片受体在大鼠脑内含量甚微，纯化过程长而 复杂，每次纯化仅得到微克级样品量，用经典的 SDS进行鉴定，样品用量较多，且回收困难， 无法用于进一步的研究。毛细管区带电泳C（ZE）分 离生物大分子愈来愈受到广泛的重视[]。由于大分 子扩散系数小，使得CZE分离效率高；CZE分析时 2 实验部分 间短，且进样量仅为纳升级，因此对阿片受体的纯度 鉴定具有重要意义。本文采用CZE分析测定了下列 2.1仪器和试剂 本文收稿日期：1992年11月14日，修回日期：1993年2月18日 实验仪器 由本所 自制[5]，熔融石英毛细管柱 teinA-Sepharose亲和色谱柱分离得到豚鼠抗-Id抗 60cm×100m 从（进样到检测器长度为50cm），硼 -OMF的IgG。 砂、氢氧化钾试剂均为分析纯，缓冲液用超纯水配 2.4.3 对照豚鼠血清IgG的制备 未免疫豚鼠的 制。所有样品均溶于超纯水中。 血清经ProteinA-Sepharose亲和色谱柱分离得到 2.2实验条件 对照豚鼠血清IgG。 缓冲液：25mmol/L硼砂、25mmol/LKOH，用 2mol/L的HCl调pH至9.10。施加电压14～18kV， 3 结果与讨论 紫外检测波长206nm，0.01AUFS，进样方式：虹吸 毛细管区带电泳分离大分子蛋白存在着严重的 法。 吸附问题，关于克服蛋白吸附于管壁的报道已很多。 2.3 冲洗 陈义[]提出，利用糖蛋白中糖羟