纳豆菌对弧菌拮抗作用的初步研究.pdfVIP

2003青岛 ·全国水产养殖研讨会论文集 纳豆菌对弧菌拮抗作用的初步研究 刘淇 李健 王群 (中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部新渔药临床试验中心 青岛 26607D 摘要 采用平板纸片法和混合培养法研究纳豆菌对副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、飘浮弧菌和DLP弧菌4种水产 养殖动物常见致病菌的拮抗作用。结果显示:(1)纳豆菌对副溶血弧菌、飘浮弧菌、溶藻胶弧菌和 DLP菌 株的抑菌圈分别为12.5mm,15.3mm,15.2mm和19.6mm。(2)纳豆菌与副溶血弧菌和飘浮弧菌在普通肉 汤培养基共同培养时，均表现出抑制弧菌生长作用，其中对飘浮弧菌的抑制作用大于副溶血弧菌。(3)纳豆 菌对弧菌拮抗作用明显，在水产养殖动物的病害防治上具有良好的应用前景。 关键词 纳豆菌 弧菌 拮抗作用 随着我国水产养殖业的快速发展和环境污染的日趋严重，水产养殖动物病害频繁发生。其中由弧菌引起 的疾病是造成水产养殖动物死亡的主要原因之一，由致病性弧菌侵袭造成的水产养殖动物死亡给水产养殖业 造成严重损失。目前病害控制的传统方法是使用抗生素等化学药物，但化学药物防治的弊端也越来越明显， 例如养殖过程中多种药物的重复使用，对养殖生态环境特别是微生态造成严重损害，引起机体自身抵抗力下 降和病原菌产生抗药性:另外药物在动物体内的残留问题越来越严重，不仅影响了产品的产量和质量，而且 严重危害了消费者的健康，特别是抓霉素事件给我国水产品出口造成严重不良影响11.21因此众多科研技术人 员把目标瞄向微生态制剂，利用微生态制荆改善养殖生态环境.增强水产养殖动物自身抵抗力，减少病害的 发生12,}s.4飞 由于微生态制剂没有残留。也不会产生抗药性，因此日益受到人们的重视。利用微生态制剂调节动物体 内的微生态平衡，恢复和提高机体生理功能、防治病害，正逐渐成为研究和开发的热点。纳豆菌作为日本传 统发酵食品— 纳豆的生产菌种，在日本己被使用了两千多年，二十世纪七十年代以来，国内外对纳豆菌的 抗菌作用进行了研究，钟青萍等报道了纳豆菌对常见食品污染微生物的拮抗效果I81藤田昭二等采用纳豆菌 防治仔猪腹泻取得良好效果191。但有关纳豆菌在水产养殖病害防治中的应用未见报道，作者选用水产养殖动 物致病性弧菌— 副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、飘浮弧菌和DLP菌株为研究对象，探讨了纳豆菌对致病性弧 菌的拮抗作用.为在水产养殖病害防治中开发应用纳豆菌提供技术支持。 1材料与方法 1.1试验材料 11.1菌种 纳豆菌 ((bacillusnatio).昆山科新生物工程有限公司提供:副溶血弧菌 (Vibrio.parahaemolytlcus),溶 藻胶弧菌 (Valginolyticus),飘浮弧菌 (V.natriegens)和DLP菌株 (briosp.本实验室分离)由黄海水产 研究所农业部新渔药临床试验中心保存. 刘淇，男，1965年11月生，副研究员，从事渔用药物和养殖生态研究，E-mail:liugi@ysrfi.ac.cn 一 __2003青岛·全国水产养殖研讨会论文集 1.1.2 培养基 营养琼脂、TCBS琼脂、普通肉汤培养基。 1.1.3 稀释液 0.85%灭菌生理盐水。 ，.2 试验方法 1.2.1纳豆菌是液和弧菌悬液的制备 用接种环沾取纯化的纳豆菌和弧菌，接种到普通肉汤培养基，28℃摇床振荡培养I6-18h后，离心收集 菌体，用灭菌生理盐水将其稀释至相当于I护CFU/mL麦氏比浊法)，然后用灭菌生理盐水稀释至所需浓度。 1.2.2纸片法测定抑菌圈 取IOCFU/mL的弧菌悬液O.ImL涂营养琼脂平板，将滤纸片(直径7.Omm 的双层滤纸)贴于上述平板上， 然后取1511L纳豆菌悬液 (10CFU/mL)点样于滤纸片上，28℃培养24h,48h,72h后观察抑菌圈清晰度和 测量抑菌圈直径。 1.2.3液体培养基中混和培养抑制实验 分别取纳豆菌和弧菌悬液接种于普通肉汤培养基中，使弧菌的起始浓度分别为10CFU/mL，纳豆菌的 起始浓度分别为1xIOCFU/mL(试验组1)和IxIOCFU/mL(试验组2)，以单一培养的待测弧菌为对照。 28℃分别振荡培养24h,48h和72h后，取样进行10倍系列稀释，取O.ImL涂布TCBS平板，每个稀释度涂 5个平板，28℃培养24h后选取适宜的稀释倍数进行菌落计数。