非水反相液相色谱法测定人血清的类胡萝卜素.pdfVIP

非水反相液相色谱法测定人血清的类胡萝 卜素 马卿云 徐定方* 周海云 李晓燕 （中山大学测试中心 广州 510275 广（州医学院附属二院 广州 510260） 提要 采用非水反相-高效液相色谱法 N（ARP-HPLC测定了正常人和胃肠道癌症病人血清的β胡萝 卜素。结 果表明，采用外标法定量，回收率为95 以上，相对标准偏差 （RSD）最大值为2.2 ，分析时间约为20min。 关键词 非水反相液相色谱法，类胡萝 卜素，β?胡萝 卜素，人血清 1 前言 NARP法测定癌症病人血清中βC及其主要类胡萝 卜素的分析方法。 近 年来 ，有关 β 胡 罗 卜素 -C┯与癌症关 系 的 研究[1～3]表明 -C能明显抑制某些癌细胞系的形 2 实验部分 成和延缓肿瘤的增长，因此，研究测定癌症病人及高 危人群血液中的 -C浓度的方法特别引起了分析工 2.1 化学试剂 β-C Sigma化 学Ч 公司 ）；乙醇迹 95 ），乙译腈，二氯 作 的叩兴趣 。在天然物镏中与 βC 的化学结 构相似 而 同时存在的一类物质统称为类胡萝 卜素。在人血清 甲烷 A（R ；甲醇 HPLC级）；正己烷 C（P 。 中目前发现的类胡萝 卜素主要有叶黄素、玉米黄质、 2.2 色谱条件 β隐黄质、番茄红素、α?胡萝 卜素及 β胡萝 卜素 美国Varian5060HPLC色谱仪，UV-100紫外- 等[4。胡萝 卜素有许多异构体，不过在新鲜的植物体 可见光检测器，检测波长450nm；色谱柱：LiChro- 中，α?及 β体表现得最为稳定。实际上，在化学结构 spher100RPC18,5m,250mm×4mmi.d.；流动相： 的构型上，α?及 β体亦不是单一的构型，而是指其 乙腈 ∶二氯 甲烷 ∶甲醇＝7020∶10（V/V；流速： 所有的反式异构体[5?6] 1.5mL/min；注样量：100L。 2.3 样品处理 类胡萝 卜素中包含了弱极性和非极性的两类化 合物，因此，采用以硅胶为固定相的正相色谱法将特 用移液管准确移取200μL血清，置于聚乙烯离 别有利于其顺反非对映体的分离，但却不利于α?及 心管中，加入400μ蘈L95 的乙醇，在超声水浴上振 -位置异构体的分离[7]，而且作为分离柱填料的硅 荡，同时用玻璃棒搅拌10min后，加入40μL正己 胶还能促进类胡萝 卜素的降解[8。采用常规反相色 烷，再于超声水浴上振荡搅拌10min，然后将离心管 和内容物放入高速离心机中，在15000r/min的速率 谱法时，为使弱极性组分能充分分离，流动相中必须 含有一定量的水分。但这将导致随后洗脱的非极性 下离心5min，用移液管准确吸取上层清液200L，放 组分峰的不对称性，甚至还会发生组分的柱上沉淀。 入高效液相色谱HPLC专用棕色样品瓶中G（ilson Co.，于60℃的水浴上，用N2气流吹干，正己烷蒸干 因此，必须采用梯度洗脱，这样就需要更复杂的仪器 和更长的分离分析时间。若采用非水反相系统 物用40μL流动相溶解，溶解物可直接注入色谱系 NARP[9?10，由于它使用非水系溶剂作流动相可以 统。 2.4 标准曲线的制备 增加非极性组分的溶解度，因此不仅可避免待测组 分的柱上沉淀，增加峰的对称性，保持柱的分离效