高效液相色谱电化学检测法测定尿液中的多胺.pdfVIP

高效液相色谱-电化学检测法测定尿液中的多胺 唐琴梅 庄凌航 徐修容 师英强 李 澍 （中国科学院上海药物研究所 上海 200031） （上海肿瘤医院 上海 200032） 提要 在已报道的高效液相色谱-电化学检测多胺方法研究的基础上，又进一步探讨了该方法用于尿样本测定 的各种条件，并测定了健康志愿者及肿瘤患者尿液中的多胺。结果显示肿瘤患者未水解及水解尿液中的腐胺、 尸胺的平均值高于健康志愿者。 关键词 高效液相色谱，电化学检测，精脒，腐胺，尸胺，柱前衍生，人尿 工作电位0.65V，灵敏度10nA 1前言 2.4水解尿液条件 电化学检测法因其高灵敏度及高专一性而广泛 2mL尿液与等体积6mol/L HCl于塑料试管中 用于生物样本中儿茶酚胺的测定，但对多胺的测定 密封，在100℃水浴中水解12h，冷却后离心除去焦 未见有报道。Allison（曾报道氨基酸的邻苯二甲醛 油状物，上层尿液用于样本预处理。 （OPA）衍生物具有电化学活性，作者据此对电化学 2.5 样本预处理 检测多胺OPA衍生物的方法作了研究（2。本文进一 取1mL尿液或水解尿液，用2mol/L NaOH碱 步探讨了OPA柱前衍生化、电化学检测用于尿样本 化至pH9，将此碱化尿液全部注入Sep-Pak C18中 测定的条件，分析了健康志愿者和肿瘤患者尿液中 （Sep-Pak先用10mL甲醇，10mL0.1mol/L醋酸， 的精脒（SPD）、腐胺（PUT）和尸胺（CAD），探讨了癌 10mL水洗涤），然后用5mL水洗Sep-Pak小柱，再 症病人尿液中多胺水平的变化。 用1mL0.1mol/L醋酸将多胺洗脱，取50μL用于衍 生化反应。 2 实验部分 2.6衍生化反应 取上述50L含多胺的0.1mol/L醋酸溶液用 2.1实验对象及样本收集 2mol/L氢氧化钠碱化至pH9，室温下加入100μL 恶性肿瘤病人为经病理切片确诊为软组织肉瘤 OPA-ET衍生试剂，在旋涡混合器旋混60s，静止 的患者共6例，良性肿瘤患者2例，健康志愿者9 30s，加入200μL乙酸乙酯，再旋混30s，静止60s，取 例，收集24h尿液，取10mL用浓HCl酸化后于 40μL乙酸乙酯用于HPLC分析。 —50℃保存备用。 2.2仪器和试剂 2.7肌酐的测定以及与尿液量康的换算 尿液中肌酐的测定采用苦味酸法（3），本实验委 Waters M6000A泵，M660梯度控制仪，U6K 托上海医科大学附属儿科医院生化室测定。尿液量 进样阀，LC-4B17型电化学检测器（Bioanalytical 与肌酐的换算如下：〔24h尿液量（mL）/24h尿液中 System INC）及岛津C-R3A数据处理仪。SPD, 的肌酐量（mg）〕×多胺含量（nmol/mL）尿液，计算 PUT,CAD,OPA及乙硫醇（ET）为进口试剂，其余