高产蛋白酶米曲霉的选育.pdfVIP

第40卷(总第121期) 吴华昌等：高产蛋白酶米曲霉的选育 47 1．2．3亚硝酸处理取孢子悬浮液2m1，加入含有表1 菌株编号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 11i o．025克分子浓度亚硝酸钠和O．25克分子浓度醋酸 蛋白酶活力 85．5475．6948．3371．7654．3096．2952．9l52．9438．3665．10 缓冲液的溶液中，在27℃下处理10min，然后取出 2m1处理液加人10mlO．07克分子浓度的磷酸氢二 钠溶液中，使反应终止，最后将处理液稀释并进行分 从表中可看出原始菌株蛋白酶活力相差较大， 离培养。 酶活力普遍较低。其中Is菌株酶活力较高，把它作 1．2．4 高温处理 取孢子悬浮液和生理盐水各 为进一步筛选的出发菌株。 5m1分别置于2支15×150无菌试管中，同时放人预 2．3紫外线处理 先恒温75℃的水浴锅中，待管内温度上升至75℃后 以I。出发菌株，用紫外线照射。倒平板，发现大 开始计时，10min后迅速冷却。处理液稀释10一一 部分菌株生长缓慢，孢子细小，色泽较深，透明圈也 10“后涂平板。 不明显。在116株菌株中，挑选出10株，色泽较浅， 1．2．5复合处理(1)紫外线和高温复合处理，紫外 菌落边缘平滑，透明圈较大的菌株，作发酵实验，测 线照射4商n，高温处理10rnin；(2)亚硝酸和高温复合 得其蛋白酶活力，见表2所示。 处理，亚硝酸o．025克分子浓度；高温处理10min。 1．3 筛选方法 表2 1．3．1 初筛悬浮液稀释至适当浓度后涂布在酪素 菌株编号 Ⅱl Ⅱ2 Ⅱ3 Ⅱ4 Ⅱ5 Ⅱ6 Ⅱ7 Ⅱ8 Ⅱ9 Ⅱ10 甲板。36℃培养48hr，挑取透明圈与菌落直径之比较 81．0557．8784．5715．3680．0486．7862．8655．8096．6568．18 蛋白酶活力 大的菌落入斜面，36℃培养4～5d，成熟后作复筛用。 1．3．2 复筛将初筛得的菌株接入三角瓶发酵培养 从表2可看出，单独用紫外线诱变蛋白酶活力 基中，36℃培养12～13hr，曲表面呈现少量菌丝时，扣 提高不明显，正突变仅1株(Ⅱ。)，其蛋白酶活力只比 瓶一次，继续培养18hr，再次扣瓶，再培养72hr。 原始菌株提高了O．37％。 1．4 分析方法 2．4紫外线、高温复合诱变 1．4．1孢子计数血球板计数法 以经紫外线处理蛋白酶活力提高了的Ⅱ。菌株 1．4．2pH值测定pHS_1型酸度计 为出发菌株，经紫外线和高温复合处理。发现菌落 1．4．3酶活测定明胶法 的生长速度有明显的提高，孢子变得稀疏。在131 株菌株中，挑选出10株透明圈与菌落之比较大，色 2 结果 泽较浅。菌落边缘平整的菌株，作三角瓶发酵实验， 2．1 米曲霉的选育谱系