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中国畜牧兽医 　2009 年第 36 卷第 7 期 生物技术 ·99 · PA GE 凝胶电泳银染方法的改进 张金成 ,梁永文 ,范丽娜 ,廖和荣 (石河子大学动物科技学院 , 石河子 　832003) ( ) 摘要 :为改良DN A 聚丙烯凝胶电泳 PA GE 银染方法 ,采用 PCR 方法扩增鸡基因组微卫星 DN A 序列后 ,经 PA GE 分离 扩增产物和 pBR322 DN A/ B su R I 标准分子质量 ,利用 2 种银染法对微卫星位点进行检测 ,分析其灵敏度和可行性 。结果表 明 ,2 种方法都能染出 Marker 的所有条带 ,灵敏度均为 25 ng ,但在染色所需时间和可操作性方面 ,改进的染色方法优于 San guinetti 等所建立的方法 。改进的银染方法染色过程较快 ,仅需 25 min 左右 ,且染色液和显影液可回收利用 。该方法能显著 提高检测分辨率 ,在实际应用中提高了染色效率 。 关键词 :微卫星 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;银染 中图分类号 :Q789 　　　　　文献标识码 :B 　　　　　文章编号 :167 17236 (2009) ( ) 　　微卫星序列 micro sat ellit e DN A ,M S ,又称简 易行 。利用建立的改进银染法 ,对鸡微卫星 DN A ( ) 扩增产物和 pB R322 DN A/ B su R I 标准分子质量进 单序列重复 simp le sequence rep eat , SSR 、短串联 ( ) 行染色分离 ,取得了十分满意的效果 。现报告如下 。 重复序列 short t andem rep eat , STR 或简单序列 ( 1 　材料与方法 长度 多态性 simp le sequence polymorp hi sm , SS L P) ,是广泛分布于真核生物基因组中的高度重复 1 . 1 　材料 ( ) 序列 , 已成为 目前动植物遗传连锁分析 、基因定位及 1 . 1 . 1 　样本 　采用 A CD 抗凝剂 体积比 1 ∶1 抗 饱和遗传标记图构建等极为重要的一种研究手段 。 凝 ,吸取 A CD 抗凝剂 1 mL 于 5 mL 一次性注射器 微卫星的 PCR 扩增产物经聚丙烯凝胶电泳分 中 ,从鸡的翅膀静脉采血 1 mL ,上下颠倒 3 次以上 , 离后 , 目标产物的检测主要方法是通过显色法 ,且 目 转移到已灭菌的 1. 5 mL Epp en dorf 管中 ,置冰盒内 前大多采用同位素放射自显影法 、荧光染料标记法 、 带回实验室 , - 20 ℃冰箱保存 , 以备提取DN A 用 。 ( 1 . 1 . 2 　主要仪器 与设备 　PCR 扩增仪 P