SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进.pdfVIP

第 24卷第4期 湖 北 工 业 大 学 学 报 2009年 O8月 V0L24NO．4 JournalofHubeiUniversityofTechnology Aug．2009 [文章编号]1003—4684(2009)04—0016-03 SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电泳染色方法的改进 叶长春 (湖北工业大学生物工程学院，湖北 武汉 430068) [摘 要]针对常规的SDS染色脱色耗时长，还需使用 甲醇的缺点，对传统的 SDS染色脱色进 行了改进，用无毒的乙醇替代有毒的甲醇．改进后的 SDS染色脱色具有耗时短，且不需要使用 甲醇的 优点． [关键词]SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS)；染色 ；脱色 ；考马斯亮蓝 [中图分类号]Q51 [文献标识码]：A SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电泳是一种检测蛋 白质 恒温水浴锅，上海一恒科技公司 HWS-26产 品． 纯度、评估蛋白质分子量的生化分析方法．电泳后 的 凝胶可以通过多种染色法对蛋 白质进行检测 ，最常 2 方法与步骤 用的是考马斯亮蓝 (Coomassiebrilliantblue，CBB) 染色法[1]．此法具有特异性强、操作简单及干扰因素 2．1 样品的准备 少等优点．因为凝胶 中存在 SDS，SDS的存在干扰 将诱导前后的大肠杆菌培养液各取 1mL，加在 了考马斯亮蓝与蛋 白质的结合．而甲醇可 以破坏凝 EPPENDORF管中，以 12000r／min离心 15min， 胶中的SDS，使考马斯亮蓝染色得以顺利进行 ，所以 弃上清 ；再加 500 L超纯水 ，混匀 ，12000r／min离 通常对电泳后 的凝胶采用含 甲醇的染色液和脱色 心 15min，弃上清；再加 3O L超纯水 ，混匀． 液．甲醇是一种无色 、透明、易燃、易挥发 的有毒液 2．2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS) 体，经人体代谢产生甲醛和甲酸 (俗称蚁酸)．甲酸会 2．2．1 溶液的配制 贮液 100mL：30g丙烯酰胺 ； 累积在眼睛部位 ，破坏视觉神经细胞 ，产生永久性损 0．8gN，N 一甲叉双丙烯酰胺．加超纯水定容至 害．甲酸进入血液后 ，会使组织酸性越来越强 ，损害 】00mL，4℃保存． 人体肾脏，导致肾衰竭[z]．而对凝胶染色脱色过程不 分离胶缓冲液 (4×)100mL：Tris碱 18．17g； 可避免会泄漏一定数量的甲醇 ，这会使操作人员的 lO SDS溶液 4m L．用浓 HCL调至 pH8．8，加超 健康受到损害．本文对传统的考马斯亮蓝 (Coomas— 纯水定容至 100mL；4℃保存． siebrilliantblue，CBB)染色法进行 了一定的改进 ， 压缩胶缓冲液 (4X)100mL：Tris碱 6．06g； 改进后的方法与传统的方法具有 同样 的效果． l0 SDS溶液 4mL；用浓 HCL调至 pH6．8，加超 纯水定容至 100mL．4℃保存． 1 材料与仪器 Tris一甘氨酸电泳缓冲液 (1×)800mL：Tris碱 2．423g；甘氨酸 11．525g；lO SDS溶液 8mL．加 诱导前与诱导后的大肠杆菌培养液各取 1mL、 去离子水定容至 800mL． 丙烯酰胺、N，N 一甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵购 白 样品缓冲液 (2×)10mL：压缩胶 buffer(4×)5 天津第一化学试剂厂；Tris碱 、SDS、TE