稀土氯化镧对白血病细胞系生长与凋亡的影响.pdfVIP

·47· 稀土氯化镧对白血病细胞系生长和凋亡的影响 李剑，李洁t戴革：戴育成t文珠， 1．南昌大学第二附属医院医学分子中心(330006) 2．江西省医学科学研究所血液室 3．江西省医学科学研究所核医学室 【摘要】 目的 化，流式细胞术及TUNEL法鉴定细胞凋亡情况；流式细胞术分析细胞周期的变化。半固体琼脂糖培养法观察 LaCl，对正常骨髓细胞形成粒一巨噬细胞集落的影响。结果在所研究的浓度范围内，随着LaCl，浓度升高， mmoFL K562细胞生长抑制率增高、凋亡率增加，呈剂量依赖性关系。随着作用时间延长，1 LaCl，对细胞的抑制 mmol／L LaCl，显示出对正常骨髓祖细胞有轻度刺激增殖效果，而较高浓度(1．5—2．0mmol／L)，正常骨髓祖细胞 形成集落数下降且含有较多巨噬细胞，集落细胞形态正常，没有显示凋亡形态。结论在所研究浓度范围内，稀 。 响。 【关键词】氯化镧；细胞凋亡；K562细胞系 稀土元素分为放射性和非放射性两种，放射性稀土元素已被用于诊断和治疗肿瘤。但关于非放射性稀土元 能力下降，Northern 降及某些基因表达升高相关。Sato等印发现l 色素瘤细胞的生长率明显低于对照组；细胞周期分析显示三价金属离子阻止细胞从GdG。期过渡到S期。为了 观察镧对白血病细胞的影响，我们研究了LaCI，对K562白血病细胞的生长和凋亡的作用。 1材料与方法 1．1细胞培养 司)按常规进行培养，每3天半量换液。取对数生长期细胞进行实验。 1．2主要试札 1．3实验分组 2．0 姆萨瑞氏染色法检查细胞形态。 1．4细胞增殖情况通过MTT法鉴定 前4h，每孔加入10斗lMTr，终止培养时，每孔加入150斗l 570am处测吸光度(A)值，生长抑制率(％)=(1一A实验组／A对照组)×100％。 1．5细胞周期及细胞凋亡率分析 取lX106细胞用70％冷乙醇(4℃)固定30min，RNase A和碘化丙锭染色60rain(37℃)后。上流式细胞 ·48· 仪(BD公司)分析。 1．6 TUNEL法鉴定细胞凋亡 100 细胞涂片于预铺有多聚赖氨酸的玻片上，10％中性甲醛固定25min，蒸馏水冲洗后，置0。2％Triton-X min， 浸泡5min，加TdT混合液37℃孵育60rain，再置0．3％过氧化氢溶液中5min，用马血清室温下封闭30 DAB染色，镜下计数300个细胞，细胞内有棕色颗粒出现者判为阳性细胞，计算阳性细胞率。 1．7 LaCl3对正常造血祖细胞的影响 巨噬细胞生长因子(rhGMCSF)和30 中，复种3孔，培养7 d。50个细胞的细胞团判为一个集落。 2结果 2．1不同浓度LaCI，对K562细胞系的影响结果 光镜下显示LaCl3处理的K562细胞体积缩小，染色质浓缩，核片断化，有些细胞显示浆膜皱缩，胞浆空泡 化，并且呈剂量及时间依赖性关系。 2．2不同浓度LaCl，处理细胞48h后，用MTI法鉴定细胞增殖及流式细胞仪分析细胞凋亡率，结果显示随着浓 度升高，细胞抑制率及细胞凋亡率均逐渐升高，呈剂量依赖性关系，分别与对照组比较有统计学意义(P0．05 或P0．01，见表1)。 mmol／L h及96 2．3用1．0 LaCl，处理24、48、72h后，流式细胞术及TUNEL法鉴定凋亡率，与对照组比较，具有 统计学意义(P0．05及P0．01，见表2)。 h后对K562细胞凋亡的影响 表1流式细