亚甲蓝循环伏安法测定肝素.pdfVIP

第30卷第9期 西南大学学报(自然科学版) 2008年9月 V01．30No．9 ofSouthwest 2008 Journal University(NaturalScienceEdition) Sep． 文章编号：1673—986812008)09一0016一04 亚甲蓝循环伏安法测定肝素 勾 华1’2， 罗红群1， 李念兵1 1．西南大学化学化工学院，重庆400715；2．遵义师范学院化学系。贵州遵义563002 互作用．在最佳实验条件下，MB与Hep通过静电作用形成复合物，导致溶液的氧化峰电流和还原峰电流均明显降 低，其峰电流差值(△i。)与Hep的浓度成正比，据此建立了一种测定Hep浓度的新方法，测定的线性范围为1．O～ 5．o卢g／mL，相关系数R=o．9986，捡测限(3盯)为o．23弘g／mL该法应用于注射液中肝素含量的测定，结果满意． 关键词：肝素；亚甲蓝；循环伏安法 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 一硫酸一N一硫酸氨基葡萄糖及葡萄糖醛酸等残基，在水溶液中由于其酸性基团的离解而成为带多个负电荷 的大阴离子．复杂的结构使肝素具有广泛的生物学功能，它在人体内由肥大细胞分泌而自然存在于血液之 中，能够抑制凝血酶原转变为凝血酶，具有延缓或阻止血液凝固的作用，是一种经典的抗凝血药物．此外还具 有澄清血浆脂质、降低胆固醇、抗炎症、抗肿瘤、抗病毒等药用价值，在临床上是一种重要的生物药物uJ．对 不同的疾病，肝素有不同的最适剂量，临床上需要进行监控．因此，研究肝素的测定方法非常重要． 肝素的检测方法主要分为生物方法旧一和化学方法两大类．临床上常采用生物方法进行监控，但受个体 影响较大，使其应用受到限制．已见报道的化学方法主要有分光光度法D_]、共振瑞利散射法∞。]、高效液 相色谱(HPLC)法¨o、毛细管电泳法凹]、电化学传感器¨们等．应用电化学分析的手段研究生物多糖类是近 几年发展起来的一种分析方法，相关的研究报道较少…J．本实验采用循环伏安法研究了肝素与亚甲蓝 (MB)的相互作用．肝素分子结构中存在大量的磺酸基和羧基，具有很高的阴离子电荷密度；MB是一种吩 噻嗪类阳离子染料，能与肝素以静电引力结合形成复合物．实验表明，在pH为3．3的融R缓冲溶液中，肝 素与亚甲蓝发生缔合，使染料发生明显的褪色，导致MB的氧化还原峰电流明显减小，且减小的程度与肝 素的浓度在一定范围内呈线性关系．基于此，建立了一种快速、简便测定肝素含量的方法，用于实际样品 的测定，结果满意． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 Ag—AgCl电极，铂丝电极为对电极；酸度计pH孓3B(上海虹益仪器仪表有限公司)． 亚甲蓝(生物染色剂，上海第三化学试剂厂)：溶于水配成溶液，使用时逐级稀释到所需浓度；肝素钠 收稿日期：2008一03—25 基金项目：国家自热科学基金资助项目；重庆市科委资助项目(csTC一2006BB0342) 作者简介：勾华(1962一)，女，贵州遵义人，副教授，主要从事电分析化学方面的研究． 通讯作者：李念兵。教授，博士生导师． 万方数据 第9期 勾 华，等：亚甲蓝循环伏安法测定肝素 17 mg／mI。(150IU／mI。)的贮备液，保存 (Hep，150IU／mg，国药集团化学试剂有限公司)标准溶液：配制1．0 均为分析纯；实验用水均为二次蒸馏水． 1．2 实验方法 水、l：1硝酸和乙醇清洗3～5min． mL，2．O×10—3mol／LMB溶液0．25mL， 在10mL比色管中依次加入pH一3．3的昏R缓冲溶液1．0 min．然后以试剂空白为参比，采用循环伏安法在 一定量的肝素钠溶液，定容至10mL，摇匀，静置30 为i。，计算△i。=