利用抗药性选育盐霉素高产菌株.pdfVIP

维普资讯 第 37卷第 4期 郑 州 大 学 学 报 (理 学 版) V01．37No．4 2005年 12月 J．ofZhengzhouUniv．(Nat．Sci．Ed．) DeC．2005 利用抗药性选育盐霉素高产菌株 吴 健 ， 戴桂馥 ， 李宗伟 ， 张晓红。， 霍裕平 (1．郑州大学生物工程系 郑州 450001；2．郑州大学物理工程学院 郑州 450001； 3．泓天威药业有限公司 河南 濮 阳457100) 摘要：采用紫外线诱变和紫外线复合氯化锂处理盐霉素生产菌株 ，利用含棕榈油的筛选平板 ，结合选育脂肪酶活力 高的菌株 ，成功获得产量提高并适应棕榈油发酵的高产菌株 Ae一4．棕榈油完全替代豆油摇瓶 l13h发酵的产量是 豆油发酵的88．7 (出发株为 69．6 )．进一步通过选育抗药性突变株获得了抗链霉素的高产突变株 E4Lt—l(摇瓶 发酵产量提高 57．4 )和抗利福霉素的高产突变株 Rift一1—2(摇瓶发酵产量提高44．9 )． 关键词 ：白色链霉菌；盐霉素 ；紫外线诱变 ；抗药性 中图分类号：Q691．5；Q937；0434．2 文章编号 ：l67l一6841(2005)04—0092—04 盐霉素是 由白色链霉菌产生的聚醚类抗生素，广泛用于杀灭鸡球虫和促进鸡的生长．盐霉素的发酵通常 以油脂为碳源_lj，在生产上普遍采用豆油，而油脂的种类对 白色链霉菌发酵生产盐霉素的产量有很大影 响．曹廷弼等研究认为，盐霉素发酵的碳源以豆油 、玉米油 、花生油 、菜籽油和麻油为佳[3]．由于油脂在原料成 本中占有很大的比重，因而开发新的、低成本油脂资源及相应的生产菌种具有重要的实践意义．许多报道显 示，利用抗生素作为选择压力能获得抗生素高产菌株 ~7]，有人甚至由此提出了核糖体工程 的概念[7]．本研 究通过抗药性和高脂肪酶活性菌株的筛选 ，成功实现了适应棕榈油发酵的高产育种 目标． 1 实验部分 1．1 材料 供试菌株为 白色链霉菌(Streptomycesalbus)，由泓天威药业有 限公司提供；鉴定菌为短小芽孢杆菌 (Bacilluspumupa)，购 自河南省药品监督检验研究所． 1．2 培养基组成 斜面和分离培养基组成 (95／)：可湿性淀粉，2；牛肉膏，0．1；硫酸铵 ，0．05；硝酸钾 ，0．1；磷酸氢二钾 ， 0．05；氯化钠 ，0．05；硫酸亚铁，0．001；琼脂，1．8．pH，7．0～7．2． 棕榈油平板：分离培养基含 10 乳化棕榈油，并加适量罗丹明B． 利福霉素平板 ：分离培养基含 1O0u／ml利福霉素． 链霉素平板：分离培养基含 1u／ml链霉素． 种子培养基组成 (％)：豆饼粉 ，3；酵母粉，1；碳酸钙 ，0．2；葡萄糖 ，4． 发酵培养基组成 ( )：豆饼粉 ，0．5；硫酸镁 ，0．01；碳酸钙 ，0．5；磷酸氢二钾 ，0．02；氯化钾 ，0．2；油 ，12； 硫酸铵 ，0．3；棉籽粉 ，1．0． 效价测定培养基组成(96／)：蛋 白胨，0．3；酵母粉 ，0．3；葡萄糖，0．1；琼脂粉 ，1．4．pH，6．8～7．0． 1．3 实验方法 1．3．1 诱变 刮取适量 白色链霉菌的孢子于生理盐水 中，震荡、打散 、过滤 ，制成单孢子悬液．28℃保温 4 收稿 日期 ：2004—12—22 作者简介 ：吴健(1973一)，男，副教授 ，硕士，主要从事微生物代谢工程和辐射生物学研究；E—mail：jianwu68@163．com 维普资讯 第4期 吴 健等：利用抗药性选育盐霉素高产菌株 93 h，吸取 5m1单孢子悬液于直径 4．5cm 的培养皿中，紫外灯下边搅拌边照射．紫外灯功率为 15w，照射时 间(s)为 ：0、10、20、30、40、50、60，照射距离为 30cm．照射后直接 中间培养或