三种适用于作物遗传转化的载体构建和验证.pdfVIP

2014学术年会：转基因作物研究及安全管理 种适用于作物遗传转化的载体构建与验证 佘茂云1 殷桂香1 张平治1 叶兴国2 (1安徽省农业科学院作物研究所，安徽合肥230031； 2中国农业科学院作物科学研究所／农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程，北京 100081) 摘要：为满足植物功能基因组学研究及转基因安全性需要，本研究根据一些国内外引进或商业化 的植物表达载体及其相关元件，构建了3个适合于植物，尤其是单子叶植物转化的表达载体，即 因的完整T—DNA区域，此区段能够被酶切回收，可用于单子叶植物农杆菌介导转化效率评价及基因 可用作基因枪介导的共转化筛选标记，直观筛选含目标基因转基因材料；pWMB025载体携带由ubi 启动子调控的、商业化转基因植物中广泛利用的EPSPS基因，可用于禾谷类作物农杆菌或基因枪介 导的遗传转化，载体多克隆住点可通过酶切方式更换目标基因。酶切鉴定结合农杆菌或基因枪介 导的小麦幼胚愈伤组织或叶片转化验证此3个载体，表明，载体构建正确，其标记基因、可视化基因 和报告基因均能正常表达。这3个载体的构建对于小麦等植物转化效率提升、安全型转基因作物获 得和植物功能基因组学研究等具有重要意义。 关键词：植物表达载体；遗传转化；标记基因；生物安全 ConstructionandValidationofThreeConvenient andPracticalConstructsfor Plant Transformation She eta1． Maoyun (1 of Institute，Anhui 23003 Crop AcademyAgriculturalSciences，Hefei1，China) enrichtoolsfor Abstract：To functional andto marker-free plant genomicsdevelop transgenicplants， three and forcereal con— plasmidvectors，pAH006，pWMB022 transformation，were pWMB025，ideal structedinthis some available vector canbeusedto studybyusing plasmids publically．ThepAH006 the mediatedtransformationonmonocotandto improve evaluatethebi． Agrobacterium system plants olistic mediatedtransformationoflinear cassetteonwhichboth particle efficiency transgeneexpression GUSandbar were controlledtheubi intactT—-DNA canbe genes by promoters；the region reeov．．