兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的表达和鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞 表位嵌合体的表达及鉴定 张 燕1,2，胡波2，宋艳华2，范志宇2，魏后军2，姜平1，王 芳2’ (1．南京农业大学动物医学院。江苏南京210095；2．江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室／ 国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京210014) 摘要：在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA 可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生物学方法将双串联OVA DN。经RT．PCR、间接免疫荧光、SDS．PAGE、westernblot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达，利用电镜观察嵌合蛋 VLPs 白病毒样颗粒的形成。结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达，且可形成与RHDV 类似的病毒样颗粒。本研究为VP60作为载体系统，有效提呈外源片段的研究提供了重要依据，同时也为VLPs 疫苗的研制奠定了基础。 关键词：兔出血症病毒；VP60；双串联OVAT细胞表位；病毒样颗粒 的缺失或改变并不影响VLPs的组装及其免疫原性【6l。 兔出血症(Rabbithemorrhagicdisease，RHD)是由 hemo disease 兔出血症病毒(Rabbit virus， 这一结果的发现使人们对VLPs的改造有了理论基 rrhagic 础，并在随后的研究中也得以证实和应用17-81。目标 RHDV)引起的一种急性、败血性、高度接触传染 性、致死性和以全身实质器官出血为主要特征的兔 表位可通过基因操作插入至VLP基因中，从而形成 传染病【lI。RHDV粒子的衣壳由一种60lll的主要结 具有安全好、耐受性强以及免疫原性高的疫苗。目 前，VLPs在预防性疫苗的研制中已取得突破性进 构蛋白(VP60)多重拷贝组成。研究发现VP60衣壳 蛋白在没有其他任何成分存在的体外条件下可自然 展，如人类免疫缺陷病毒样颗粒、流感病毒样颗 聚合成不包裹核酸的、与天然RHDV病毒粒子在物粒、肝炎病毒样颗粒等。种种迹象表明，VLPs疫苗 理形态上类似的病毒样颗粒(VLPs)‘∞I。 将是未来疫苗发展的主题。 近年来，随着对VLPs研究的不断深入，VLPs然而目前对兔出血症病毒样颗粒的研究较少， Chen等人191研究显示，VP60P1区域的408、 在体液免疫和细胞免疫中的活性已被人们认知，其 Rong 在基础研究、疾病预防、疾病治疗方面的优势愈加 明显14-sl。病毒样颗粒具有安全性高、免疫原性强、 稳定性好和可改造等优点。随着反向遗传学研究的 其余P区域变异程度较高。BarcenaJ等110I研究者发 不断深入，研究者发现一些病毒结构蛋白的氨基酸 现VP60三维构象的形成与各个亚基的N．末端序列 author *Corresponding 基金项且：国家自然科学基金项目；江苏省自主创新项目【CX(12)3079】 作者简介：张燕(1987．)，女，江苏常州人，硕士，主要从事畜禽传染病防控研究 }通信作者：E-mail：rwangfang@126．com 一297— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 有关，N端42个氨基酸是VLPs装配非必须的，而 缺少c端氨基酸则不能形成VLPs