以多肽为抗原的HIVELISA检测试剂的影响因素分析.pdfVIP

57 应用预防医学 2015年2月第21卷第1期 JApplied Prev Med, February 2015, Vol 21 No.1 ·实验研究 · 文章编号：1673-758X(2015)01-0057-02 中图分类号：R512.914 文献标识码：A 以多肽为抗原的HIVELISA检测试剂的影响因素分析 吴君荣 ，李山 ，魏勋斌 ，申卫东 ，丁佩明 ，闭柳燕 ，秦雪 ，1 2 3 4 5 5 2 王健 ，黄珊 ，伍惠玲 ，李海炜 ，陈学杰 ，邓燕2 2 2 2 2 2 1广西医科大学附属肿瘤医院检验科（广西南宁530021）2广西医科大学第一附属医院检验科（广西南宁530021） 3上海复旦大学生物医学研究院（上海200032）4广西南宁市中心血站输血医学研究所（广西南宁530003） 5北海新升技术开发有限责任公司体外诊断试剂研发中心（广西北海536000） [摘要] 目的 探讨以化学合成多肽为抗原的HIVELISA检测试剂制备过程中的影响因素。方法 分别采用链 霉亲和素、牛血清白蛋白偶联剂偶联HIV多肽抗原后包被经紫外线处理或未经紫外线处理的酶标板，同时检测HIV 阳性、阴性标本，阳性血清OD＞1.0，阴性血清OD＜0.1为检测成功，分别重复24孔，计算成功率。结果 链霉亲 和素偶联的HIV多肽抗原包被经紫外线处理后的酶标板成功率最高，为100.0%（48/48），且显色本底最低。结论 采 用链霉亲和素偶联HIV多肽抗原及紫外线预处理酶标板对提高检测效果具有很大的帮助。 [关键词] 多肽；抗原；链霉亲和素；紫外线；HIV；ELISA 化学合成多肽由于具有很高的特异性，近年 限公司生产。牛血清白蛋白（BSA）为杭州四季青 来被广泛用于病毒血清学诊断试剂抗原的实验研 生物工程材料有限公司生产。 究。随着分子生物学技术的飞速发展及不断成 1.2 实验方法 空白酶标板预处理，将空白酶标 熟，方便了我们通过化学的方法合成性质更加稳 板置紫外灯下照射30分钟后立即包被。 [1] 定的特异性多肽抗原 。目前，广西壮族自治区属 1.2.1 固相抗原的包被 （1）未偶联包被抗原： 于我国艾滋病的高发区，早期检测艾滋病毒的感 直接用0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液将混合多肽 染，对预防疾病的传播和及时治疗具有极其重要 抗原配制成10μg/mL的抗原液，分别包被未经紫外 的意义。本研究采用化学合成4种特异性多肽抗原 线处理及经紫外线处理后的空白酶标板孔，每孔 （HIV-1gp41、gp120、p24和HIV-2gp36）为主要包 100μL ，37℃放置2h；甩干孔内液体，用洗涤液 被原材料，探讨制备ELISA检测试剂的影响因素。 （PBST）洗涤一次，拍干孔内液体后，每孔加入 1 材料与方法 150μL 1%BSA封闭液，37℃放置2h；甩干孔内液 体，用PBST洗涤一次，拍干后进行ELISA检测。 1.1 材料 空白酶标板条为英科新创（厦门）技 （2）链霉亲和素偶联包被抗原：采用戊二醛偶联 术有限公司生产。抗原由北海新升技术开发有限 法先把混合抗原与链霉亲和素进行偶联，配制成 责任公司提供，包括HIV-1gp41、gp120、p24和 10μg/mL的抗原液包被酶标板孔，其余步骤同上。 HIV-2gp36共4个区段。血清标本由广西区疾病预