高免卵黄抗体粗提条件优化及稳定性检测.pdfVIP

维普资讯 第 30卷 第 1期 延 边 大 学 农 学 学 报 V01．30NO．1 2008年 3月 Journa[ofAgriculturalScienceYanbianUniversity M ar．2008 高免卵黄抗体粗提条件优化及稳定性检测 武振久 ， 成漠。， 许应天。 (1．吉林市动物检疫站，吉林 吉林 132013；2．青岛化工学 院，山东 青岛 266042； 3．延边大学农学 院，吉林 龙井 133400) 摘要：对高免卵黄抗体 (1gY)粗提过程 中的水稀释倍数 、pH值和 4℃下温浴时间等环节进行 优化试验，检测纯化后 IgY的稳定性．结果表明：IgY的最适粗提条件为卵黄稀释倍数7倍 ，卵 黄稀释液pH值 5．0，4C下温浴 5h，纯化后的 IgY活性在低于 70C下处理 15min，3次以内 的反复冻融及 pH值4～7范围等条件下几乎不受影响． 关键词：高免卵黄抗体 ：最适粗提条件 ：优化；稳定性 中图分类号 ：$852．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—7999(2008)01—0072—05 自Klemperer于 1983年首次报道鸡蛋中存在抗体 以来，进一步研究证明鸡蛋内的抗体 主要存在于卵黄内，称为卵黄抗体(eggyolkimmunoglobulins，简称 IgY)．卵黄抗体以IgG 占优势，而 IgA和 IgM 的含量极低[1．近 20年来 ，国内外学者对卵黄抗体 的制备和应用做 了大量研究[2 ．但 由于高免卵黄 自身存在的一些缺陷，如蛋黄中含有大量杂蛋 白及脂肪等 物质，造成注射困难、难 以吸收、局部肿胀、过敏反应、保存和运输不便等，限制了其在疾病防 治上的应用[6]．本试验 旨在克服 IgY的上述缺点进行 了IgY最适粗提条件 的筛选试验． 1 材料与方法 1．1 材料与试剂 抗原(致腹泻大肠杆菌E．Coli44560)；SDS电泳成套试剂 (中国科学院西 巴斯 生物技术公司)；免抗鸡 HRP酶联试剂 (Sigma公司)；免疫佐剂 (弗 氏不完全佐剂即羊毛脂 ： 液体石蜡：生理盐水一1：2：1)；试验鸡(吉林市农科院鸡场产蛋率为 909／5的8个月龄产蛋 鸡 ，共 100只)． 1．2 免疫接种 将 10。CFU／mL的E．Coli44560灭活溶液与弗 氏不完全佐剂等体积混合均匀，经乳化 作为免疫原，给50只试验鸡翼腹 4处进行深部肌肉注射 ，每点0．25mL，每只鸡 1mL，1周、 4周及 4个月后进行强化免疫．试验前后每隔 10d采血分离血清 ，用 ELISA方法检测抗体 效价．根据抗体效价确定用鸡蛋时间，另外 50只鸡空 白处理为对照组． 1．3 IgY粗提条件的筛选 先分离蛋清和蛋黄 ，将蛋黄用无菌双蒸馏水稀释成不 同比例 ，用稀 HCI调至不 同pH 值，在4℃下放置不同时问，并以4IC，3000r／min离心 1h，上清液用 60 (NH )。SO 盐 收稿 日期 ：2007--09—25 作者简介：武振久 (1963一)．男 ．吉林吉林人．吉林市动物检疫站副研究员．许应天为通讯作者 ， Tel：0433—3264685、E—mail：ytxu@ybu．edu．Cr1． 维普资讯 第 1期 武振久，等：高免卵黄抗体粗提条件优化及稳定性检测 73 藩 釜 警蓬