十四章 荧光.pptVIP

第十四章 荧光分析法 第一节 概述 荧光分析法 三、荧光分析法 本章主要 学习分子荧光 五、荧光分析法的特点 优点:1.灵敏度高，检出限10-10~10-12g/ml （紫外：10-7g/ml) 2.选择性好 3.线性范围宽 缺点：应用范围窄 第二节 基本原理 一、分子荧光的产生 激发态时: 分子轨道中的两个电子自旋方向可相反，也可平行，后者则有总自旋量子数S=1/2＋1/2=1，因而具有抗磁性(eliamagnetic)，能与磁场相互作用而产生能级分裂。这种现象可用分子的多重性M表示，即M=2S＋1 分子的激发态——单线激发态和三线激发态 当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后，被激发跃迁到能量较高的轨道上，通常它的自旋方向不改变，即?S=0，则激发态仍是单线态，即“单线(重)激发态”；如果电子在跃迁过程中，还伴随着自旋方向的改变，这时便具有两个自旋不配对的电子，电子净自旋不等于零，而等于1： S=1/2+1/2=1 其多重性： M=2S+1=3即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂，这种受激态称为“三线(重)激发态”；。 “三线激发态” 比 “单线激发态” 能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的，即跃迁几率非常小，只相当于单线态 → 单线态过程的 10-6~10-7 由此可见UV光谱通常是由基态单线态至各种激发单线态之间的跃迁引起 (二)荧光的产生 激发:整个跃迁过程如图14?2表明：分子吸收辐射时，可由电子基态（S0）的最低振动能级（V0）激发至第一电子激发态或更高电子激发态（S,S ……）的任一振动能级（Vi(i≥0)）， 荧光:在介质中这种激发态分子通过无辐射跃迁，以热能形式损失其能量后下降至第一电子激发单线态的最低振动能级（S，V0），然后再以光辐射形式跃迁到电子基态的任一振动能级（S0，Vi(i≥0)）； 激发态分子返回基态的途径 （三）无辐射跃迁 处于激发态的电子，通常以无辐射跃迁方式或上述辐射跃迁方式回到基态。 无辐射跃迁是指以热能形式释放其多余的能量，它既为荧光或磷光的产生创造条件，又可能与其相竟争使之减弱或熄灭， 振动弛豫 1．振动弛豫(vibrational relexation) 激发态分子在很短的时间内(秒)由于分子间的碰撞或者分子与晶格间的相互作用，以热的形式损失掉部分振动能量，从同一电子能态的各较高振动能级逐步返回到达最低振动能级 2．内部能量转换（internal conversion） 两个电子能级非常靠近以致其振动能级有重叠时，内转换特别有效。 内转换的速度很大程度上决定于此过程所包含的能级之间相对能量差 S 中高振动能级常常同S 中低振动能级相重叠（即UV光谱长波长峰和相邻峰部分重叠），易发生内部能量转换，而且速度很快 外部能量转换（外转换） 3．外部能量转换（external conversion） 简称外转换 激发态分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光强度减弱甚至消失。 也称为荧光熄灭或荧光淬灭。 4．体系间跨越(intersystem crossing) 又称体系间交叉跃迁， 指不同多线态间的无辐射跃迁。如内转换一样，若两电子能态的振动能级重迭，将会使这一跃迁几率增大。 S → T 的跃迁即为体系间跨越 荧光和磷光的主要区别 激发光谱与发射（荧光）光谱 发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光(或磷光强度)与发射光波长关系曲线。 激发光谱与发射光谱的关系 第三节 荧光与分子结构的关系 荧光物质的必要条件 分子结构与荧光的关系 一、分子结构与荧光的关系 （一）荧光物质的必要条件 分子产生荧光，必须具备两个条件： （1）物质分子必须有强的可见-紫外吸收 分子结构应具有共轭结构（或含不饱和杂原子基团），产生 跃迁或 跃迁 （2）分子吸收辐射能后，必须具有一定的荧光量子产率。 即荧光效率（ ）应足够大。 通常：0 1 （二）分子结构与荧光的关系 1.跃迁类型：K带强吸收 激发: 发射: 2.长共轭结构物质，易产生 共轭程度越大，产生荧光强度越强，荧光效率越大，波长长移。 例： 苯 萘 蒽 9-乙烯蒽 λex 205 286 356 λem 278 321