水牛角粉酶解提取方法探讨.pdfVIP

药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(I-) 水牛角粉酶解提取方法探讨 杜雪1．李保国2，历博文2，曲东平1李铁军1，黄丽华1，田景振2，张孝卫’ (1济南市卫生科技中心，2山东中医药大学) (·通讯作者张孝卫济南市利农庄路33号250013) 摘要：水牛角是临床常用药，其水解的工艺已有研究报道．本文首次应用酶解的方法进行提取，选 择最佳工艺条件．目的：研究水牛角粉酶解的最佳工艺。方法：对水牛角粉的酶解条件进行单因素 试验考察，并通过正交实验筛选最佳工艺，应用中空纤维超滤的方法对酶解物进行分离与富集。结 果证明：水牛角粉最佳酶解工艺为：胃蛋白酶酶解，药液PH为2，加酶量为3500u·g一，温度39℃， 时间为4h． 水牛角始载于《名医别录》，为牛科动物水牛的角，主产于华南、华东及西南等地，应用历史悠久， 为临床常用中药．性味苦、寒，具清热、解毒、凉血、定惊作用，临床用于温病高热、神昏谵语、发斑 发疹、吐血衄血、惊风癫狂等症，疗效显著【1】． 文献资料表明以往的研究只是对水牛角粗提取物的药理作用进行初步的实验观察，而对于水牛角的 活性物质及药理活性研究较少，药材在口服进入人体胃肠道后，一般要经过各种酶的消化吸收，活性物 质才能到达靶部位发挥药效。原药材直接口服一般效果较差，活性物质的种类较少、含量较低，生物利 用度低，浪费大量的原药材。为解决水牛角本身性质与临床用药的不合理性，我们模拟人体胃肠道环境， 采用生物酶仿生提取水牛角有效提取物，防止活性成分失活损失，确保临床用药的安全和疗效的充分发 挥，为新制剂的开发奠定基础。 一、仪器与试药： JAPAN)；SHZ．13I循环水真空泵(上海亚荣生化厂)。 光度扫描仪(TOKYO 92】005)． 二、水牛角酶解液的制备： (一)提取工艺的考察： 1工艺流程：参照文献方法进行【21。取水牛角粉1．0g按不同条件进行酶解提取，提取液放入85℃ rain，再 rpm离心10 的水浴中灭活15min后将提取液用滤纸过滤，澄清滤液先稀释lO倍后，按12000 将收集到的上清液稀释1倍得样品液测定。 最佳工艺流程如下： 医磊—型～隔赢■芦塑爿丽阖骂{水牛角粉1Il———◆l酶提取液r————1灭活后酶提取液r———， 灭活 滤纸 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集or-) 广———————1 ————◆l样品液 l 图1工艺流程图 2测定波长的选择： 牛血清白蛋白标准液的配制：精确称取25 ml的量瓶中，定容，配制浓度 mg牛血清白蛋白置于25 为1000 ug-m11的蛋白溶液． 分别移取1ml的蒸馏水及牛血清白蛋白标准液放入试管中，加入5lnl考马斯亮蓝显色剂作为对照 品管以及标准品管．用紫外分光光度计以对照品调零点，对标准品在全波长范围内(200-700rim)进行 扫描，扫描图谱如下． 2∞ 300 柚O S∞ 600 700 图2标准品全波长扫描图 通过图谱分析可知，在可见光595nm处有强吸收峰，故选择595nm为分析波长． 3不同种类酶的筛选： 取两个锥形瓶，分别称取水牛角粉1．0 ml，用浓盐酸调PH=2．O，各自加入等效的胃 g，加蒸馏水9 蛋白酶及胰酶，在37℃水浴中酶解4h，灭活后配制样品管，测吸光度． 表1．