新型大白菜细胞质雄性不育系RC7不育机理分子水平探索.pdfVIP

新型大白菜细胞质雄性不育系RC7不育机理分子水平探索 赵利民 陈夫贵巩振辉柯桂兰 (西北农林科技大学园艺学院，杨凌712100) 鬈圈 应用PCR方法从大白菜细胞质雄性不育系RG中扩增出与雄性不育基因相关的基因片 oA。说明 段，并进行测序分析，证明该片段与NCBI发布的orfl38具有高度同源性，其同源性为100 的进一步利用提供科学依据。 E圈大白菜 细胞质雄性不育系 序列分析orfl38 大白菜(Brassica L campestris 径是自交不亲和系及自交迟配系的利用；第二种途径是雄性不育系的利用。自交不亲和系及自交迟配 系利用过程中存在的主要问题有：原种繁殖需要人工剥蕾，费工费时，成本高；采用盐水喷雾、提高 cOz浓度、钢刷授粉、电助授粉以及化学药剂处理等方法也难以较大幅度提高产籽率；随着自交代数的 增加双亲生活力易衰退，种子生活力、植株抗逆性迅速下降；制种过程如遇连阴雨或虫源少的情况， 自交率提高，影响种子质量。利用雄性不育系生产杂种一代，可以克服以上问题，特别是大白菜细胞 质雄性不育材料的选育和利用，具有制种简单、应用方便、成本低廉等优点，是杂种优势利用的最佳 途径，多年来一直是作物育种者研究的重点和前沿课题。近20多年来，大白菜细胞质雄性不育系，国 十字花科作物上；其缺点是育性易受环境条件影响，不育度不能达到100％。Ogura胞质不育源的优点 是雄蕊退化彻底，无花粉，不育性稳定，不育株率和不育度均为100％；其缺点是植株苗期叶片黄化、 生长迟缓、蜜腺退化和配合力差r1~。 针对上述现有技术存在的缺陷或不足，柯桂兰、赵利民利用1997年引进的新的甘蓝型油菜萝卜细 胞质雄性不育材料RC9，一。为不育源，与不同类型大白菜杂交、多代回交转育其不育性。于2003年成功 育成了不育性稳定、幼苗无黄化、蜜腺发育正常、植株生长势强健、配合力好，不育株率及不育度均 达100％的大白菜胞质雄性不育系RC7，目前已大面积应用于制种。为了进一步探索不育系RG不育形 成的机理，为进一步利用这一优良不育源提供科学依据，本研究在分子水平剖析了RG的不育特性。 1材料与方法 1．1试验材料 不育系RG及其保持系B7不同时期的花蕾、开放的花朵以及叶片等均取自于西北农林科技大学杨 凌试验示范基地。 221“ 巴：!!坚!!婪1 2DoI∥掰 1．2试验方法 1 2 1线粒体DNA的提取与纯化 参考张战凤等“及NuziaSemfi…等的方法提取线粒体DNA(mtDNA)。 1．22 CMS相关基因的克隆 根据Ogurat…等发表的。吖138序列．设计引物序列． 138F：5-ACGGGAAGTGACAATACC3’ 1 38R：5‘ATTGGGTTCACAAAGCAT3’ 10X Mgelz 1 dNTPs0 buffer(不含M酽1)2p1．25raM8／al，lOX 4一，上下游引物各08／A至终浓度 0 DNA聚合酶(promega公司生产)1U，模板15 20至20“1。PCR反应 8pmol／1．．Taq ng．朴加ddH 条件：95C预变性4min，94℃1 保存。 PCR扩增产物经1 0％的琼脂糖凝腔电泳．用DNA回收试剂盒回收纯化。回收产物与pMDl8-T 载体连接，质粒转化到大肠杆菌中．挑斑鉴定，选出有外源片断产物进行测序。 1 23克隆片断的生物信息学分析 件分析。 2结果与分析 2．1线粒体DNA的提取及琼脂皓凝腔电泳分析 提取的材料R【=^叶片mtDNA经08“琼脂糖凝胶电泳柱测，电泳条带清晰，无托尾(网1)，满足 后续试验需要， 2．2大白菜雄性不育相关基因片断的克隆 不育系RGmtDNA扩增出大小为500bp左右的条带．而其戤持系中没有该条带(罔2)。