HIV-1病毒样颗粒的纯化及其免疫原性.pdfVIP

中国生物制品学杂志2008年 11月第21卷第 11期 ChinJBiologicalsNovember2008，Vo1．21No·11 ：昼 ： 中国图书分类号 R373．9R392．33 文献标识码 A 文章编号 1004—5503(2008)ll-0985-03 【预防制品】 HIV．1病毒样颗粒的纯化及其免疫原性 张喜珍 赵东海 。 孔维 于湘晖 【摘要 】 目的 纯化HIV一1病毒样颗粒，并检测其免疫原性。方法 稳定表达HIV一1结构蛋白Gag和Env的重组293细 胞经大规模培养后 ，收集培养上清，经 30％蔗糖垫两次纯化，免疫 BALB／c小 鼠，Westernblot检测小 鼠血清中抗体水平。 结果 重组293细胞培养上清的纯化产物经SDS．PAGE分析，可见 目的蛋白的表达。Westernblot检测显示，纯化蛋白具有 良好 的反应原性。免疫小鼠后能够诱导产生针对 目的蛋白的抗体，其抗体水平呈剂量依赖关系。结论 纯化的HIV一1病毒样颗粒能 够诱导小鼠产生抗体，具有良好的免疫原性。 【关键词】 人免疫缺陷病毒 1型；病毒样颗粒；纯化；免疫原性 PurificationandImmunogenicityofHIV一1一likeParticles ZHANGXi．zhen，ZHAODong—hai，KONGWei，etal(VaccineResearchCenter，Collegeof，J Science，Jilin University，Changchun130021，China) A【bstract】 Objective TopurifyHIV-1--likeparticlesanddeterminetheirimmunogenicity．MethodsCulturetherecombi- nant293cellsforstableexpressionofHIV一1structuralproteinGagandEnvinalargesca]e，collecttheculturesupernatantandpuff— fylbyultJacent】fLlgationusing30％sucrose．ImmunizeBALB／Cmicewiththepurifiedproteinanddetemrinetheserumneutralizing antibodybyWesternblot．Results SDS—PAGEshowedthattargetproteinwasexpressedintheculturesupernatantofrecombinant 293cells．Thepurifiedexpressed protein showedgood reactogenicity asproved byWestern blotandinduced specificantibodyin miceinadose—dependentmode．Conclusion HIV—l—likeparticlesinducedantibodyinmiceandshowedgoodimmunogenicity． 【Keywords】Humanimmunodeciencyvirustypel；Virus—likeparticle；Purification；lmmunogenicity 人免疫缺陷病毒 1型 Humanimmunodeficiency 原性，为其应用奠定了基础，也为今后艾滋病疫苗的 virustype1，HIV一1)病毒样颗粒 (Viurslikepanicles， 研发提供了新的参考。 VLP)能够模仿病毒的免疫功能却没有感染性，可以 通过不同途径加工和呈递，像天然病毒感染一样由树 1．材料与方法 突状细胞呈递进入胞内途径，引起中和抗体反应和 1．1细胞 CD4q细胞的增殖及CTL反应 l1。VLP进入机体后 重组293细胞，可稳定表达HIV．1结构蛋 白Gag 首先刺激B淋巴细胞，诱导特异性体液免疫应答，其 和Env的病毒样颗粒 [，由吉林大学疫苗研究中心 次被巨噬细胞及或树突状细胞吞噬处理，与MHCII 保存。 类分子结合，形成抗原复合物，提呈到细胞表面后， 1．2试剂 被 CD4+T细胞所识别，并使之激活，释放细胞因子 ， DMEM培养基和胎牛血清购 自