扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2浓度的影响.pdfVIP

· 山东中医杂志2005年6月第24卷第6期 · 36l 扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H：z凋亡 及细胞内Ca2+浓度的影响 李元青，赵健雄，程卫东，徐瑞峰 (兰州医学院中西医结合研究所，甘肃兰州730000) [摘要]目的：观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞Hzz凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度 的影响，探讨其抗肿瘤机制。方法：FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌Hzz细胞，电子显微镜观察FYK含药 血清诱导H。。细胞凋亡的形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变 化。结果：FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H：。细胞发生凋亡，同时使细胞内游离钙离子浓度升高，并与剂量和时间 存在依赖性关系，细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论：FYK含药血清可通过改变细胞内钙离 子浓度诱导细胞发生凋亡，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。 [关键词]扶正抑瘤颗粒；含药血清；细胞凋亡；钙离子浓度 [中图分类号]R285．5[文献标识码]A [文章编号]0257-358X(2005)06—0361-03 定，兰州佛慈制药有限公司按相关工艺流程制成，每 钙离子(Ca2+)在细胞的生命活动中具有重要 作用，所有类型细胞的各种功能均不同程度地被 袋9g。天仙胶囊由吉林通化长白山药业股份有限 Ca2+调控¨j。Ca2+主要作为细胞信使传递细胞外公司生产，批 信号，是多种受体激动后信息传递的中心环节。钙 信号的发生是基于细胞胞浆中游离钙离子浓度 Electric (ECa2+]i)时空依赖性的变化，与肿瘤细胞的凋亡关 系尤为密切。研究表明中药可以通过影响细胞内钙 学仪器厂产品)；Coulter 离子浓度而诱导细胞凋亡[2]，本实验以扶正抑瘤颗 (美国BD公司生产)；倒置相差显微镜和普通光学 粒制备含药血清后，观察其诱导小鼠肝癌细胞Hzz 显微镜(日本OLYMPUS产品)；JEM100一CX透射 L．LTD生产)；激光扫描共 凋亡的作用，及其对细胞内游离钙离子浓度变化的 电子显微镜(日本JEO 影响。 聚焦显微镜系统(Leica，TCSSP2型，德国)；RP— 1材料与方法 、 1．1 实验动物 纯种青紫兰兔20只，雄性，体重 四季青生物工程材料有限公司生产；碘化丙啶(PI)， 1．8～2．5 Triton-X100，RNase kg，由中国兰州生物制品研究所动物室提 A均为Sigma公司产品；其他 试剂均为国产分析纯。 供(甘动字14—001)。清洁级昆明种小鼠20只，体重 20±2 1．5实验方法 g，由兰州医学院动物实验中心提供(甘动字 14—006)。 1．5．1 细胞培养小鼠肝癌细胞株H。：常规接种 1．2细胞株小鼠肝癌细胞株Hz：由兰州医学院 于昆明种小鼠腹腔保种。实验前取腹腔接种7d之 药理教研室惠赠。 小鼠的乳白色腹水，PBS漂洗1次后调整细胞浓度 1．3药物扶正抑瘤颗粒(FYK)由黄芪、当归、莪为(1～5)X105，转种于含10％小牛血清的RP— 术、墓头回按3：1：1：3组方，生药由甘肃省药材M11640完全培养基中(内含青霉素、链霉素各 公司提供，经兰州医学院生药教研室周印锁教授鉴 100 生长期细胞进行