LDL、oxLDL对THP-1巨噬细胞PCSK9、LDLR表达的影响研究.pdfVIP

维普资讯 ■= PIIII! … www．pibb．ac．cn LDL、oxLDL对 THP．1巨噬细胞 PCSK9、 LDLR表达的影响研究木 刘录山” 程艳丽 谢 闵 杨 琼 潘利红 姜志胜 唐朝克 危 当恒 唐志晗 (南华大学心血管病研究所，动脉硬化学湖南省重点实验室，衡阳421001) 摘要 为研究低密度脂蛋I~(LDL)、氧化修饰的低密度脂蛋 白(oxLDL)对 n口．1源性巨噬细胞中PCSK9、LDLR表达的影响 及两者之间的关系．分别用 0mg／L、10mg／L、20mg／L、30mg／L的LDL和 0mg／L、10mg／L、20mg／L、30mg／L的oxLDL 处理Tl -1巨噬细胞，油红 O染色检测细胞荷脂情况，免疫荧光检测TI-IP-1巨噬细胞上 )~CSK9蛋 白表达及分布情况， RT-PCR、Western blot检测 TI-IP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLRmRNA、蛋 白质的表达 ．结果发现，不同浓度 LDL处理 Tl ．1巨噬细胞后，随着 LDL浓度的增大，细胞 内脂滴数 目略有增多．免疫荧光染色发现，PCSK9在 THP．1巨噬细胞上的 表达随LDL浓度的增加而增多，胞浆内定位于某一特定细胞器中；RT．PCR、Westernblot检测发现，LDL可以呈浓度依赖 性下调TI-IP-1巨噬细胞中LDLR的表达和上调PCSK9的表达．不同浓度oxLDL处理TI-IP-1巨噬细胞后，随oxLDL浓度的 增大，脂滴颗粒明显增加；oxLDL处理对 TI-IP-1巨噬细胞上PCSK9、LDLRmRNA、蛋 白质的表达影响均不明显．研究结 果表明：THP-1巨噬细胞上，同时有PCSK9和 LDLR的表达，且PCSK9定位于胞浆中某一特定细胞器；oxLDL对 TI-IP．1 巨噬细胞 LDLR和PCSK9表达没有影响；LDL能够降低 TI-IP．1巨噬细胞表面 LDLR的表达 ，同时上调PCSK9表达，初步 说明在THP-1巨噬细胞中，两者有一定的相关性． 关键词 低密度脂蛋I~(LDL)，氧化修饰的低密度脂蛋I~(oxLDL)，PCSK9／NARC．1，低密度脂蛋白受体(LDLR)，动脉粥样硬 化，THP．1巨噬细胞 学科分类号 R363 前蛋 白转化酶(proproteinconvertase，PC)家族 于内皮下，经过细胞氧化修饰形成oxLDL．动脉 在多种前蛋 白的生成过程 中起重要作用 ．PCSK9 粥样硬化发生主要是血管壁巨噬细胞和 ／或平滑肌 基因(proproteinconvertasesubtilisin／kexin9一丝氨酸 细胞大量摄取进入血管壁的脂质，尤其发生氧化修 蛋 白酶)编码神经凋亡调节转化酶(neuralapoptosis— 饰的脂质，从而导致泡沫细胞和脂质池的形成 ． regulatedconvertasel，NARC一1)，是PC家族的成 PCSK9是否直接影响巨噬细胞和平滑肌细胞脂质 员之一，它能够在蛋白质水平降低肝细胞上低密度 代谢?脂质对这二种参与血管壁脂质代谢的细胞 脂蛋 白受体(1owdensitylipoproteinrec印tor，LDLR) PCSK9表达的影响如何?本研究以THP一1巨噬细 的数量，影响低密度脂蛋I~ICLDL)的内化，使血液 胞为研究对象，经过 LDL、oxLDL处理后，观察 中LDL不能被清除，从而导致高胆固醇血症．该 细胞水平 PCSK9、LDLR的变化及其规律 ，为 基因的突变成为继LDLR、apoB100基因之后的第 PCSK9在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实 三种引起常染色体显性高胆 固醇血症的基因1]【．高 验依据． LDL胆 固醇血症是一个 已被确认的动脉粥样硬化 独立危险因素2]【．但是经 LDLR进入细胞的LDL水 ·国家 自然科学基金资助项 目和湖南省教育厅资助