鸡传染性法氏囊病毒实时QRT-PCR检测方法建立及初步应用.pdfVIP

鸡传染性法氏囊病毒实时QRT-PCR检测方法的建立及初步应用 周欣杨霞赵军王新卫 常洪涛陈陆刘红英 姚惠霞王川庆 河南农业大学，河南郑州450002 引言 了解鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖滴度 的传统方法是测定其TCID50，该方法不但费时、费 力，而且灵敏度低。因此，无论是在科学研究还是在 实际生产工作中，都需要一种快速、准确测定IBDV 即时增殖滴度的方法。随着分子生物学技术的发 展，荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)技术以其快速、敏 感、特异性强等优点在基因表达水平的分析、病原体 的定性和定量检测等方面得到了广泛的应用。本研 究建立了一种快速检测IBDV增殖滴度的SYBR GreenI荧光定量RT-PCR检测方法，并首次用于IB DV在DF-1细胞中繁殖滴度的测定，与传统的 TCID50法相比，不但快速而且更敏感，为IBDV的检 测和其它相关研究提供了一种有效手段。 VP5蛋白是IBDV感染细胞的表面分子标记 吴永平1,2周继勇1 1.浙江大学，农业部动物病毒学重点实验室，浙江杭州310058 2.浙江农林大学动物科技学院，浙江杭州临安市环城北路88号311300 前言 传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组由A和B 两个节段的双链RNA组成。A节段含有大、小两个 重叠的开放性阅读框架(ORFs)，VP5蛋白由小ORF 编码。VP5蛋白是一个Ⅱ型跨膜蛋白，有报道称 VP5蛋白在病毒的致病性方面起重要作用。Yao 等[1]证明VP5蛋白能诱导细胞凋亡。此外，研究[2] 发现VP5可能与子代病毒的释放有关。VP5的特 异性单克隆抗体对VP5功能的探索是一个十分必 要的检测工具。本研究的主要目的是获得稳定分泌 抗VP5蛋白的特异性单克隆抗体。