腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制mTOR信号通路缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积.pdfVIP

第 44卷第 1期第 10页 华 中科技大学学报(医学版) Vo1．44 No．1 P．10 2015年 2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Feb． 2015 腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制 mTOR信号通路 缓解糖尿病大 鼠肾脏细胞外基质沉积* 罗 霞， 邓玲艳 ， 许文娟 ， 程黎明△ 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科 ，武汉 430030 摘要 ：目的 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素 (streptozocin，STZ)诱导大 鼠糖尿病模型，尾静脉注射人重组腺相 关病毒介导的截断突变型腺苷酸活化蛋 白激酶基因AMPK—CA(AMPKal” ，T17-2D)，观察AMPK基因治疗对糖尿病 大鼠肾脏 的保护作用并进行相关机制研究。方法 24只雄性 Wistar大 鼠随机分为糖尿病组 (n一16)和普通饮食组 (”一 8)，糖尿病组以高糖高脂饮食加小剂量 STZ诱导糖尿病模型，8周后再将其随机分为两组 ，分别经尾静脉导人表达持续 激活型AMPK—CA的重组腺相关病毒 rAAV2-AMPK—CA和 rAAV2GFP作为对照，观察 l2周后处死实验动物 ，留取 肾 脏组织 。PAS染色观察 比较各组大 鼠肾脏 的病理改变 ，Real—timePCR法检测各组细胞外基质 的mRNA 水平变化 ， Westernblot法检测Ⅳ型胶原蛋 白dl(Co14a1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及磷酸化 AMPK、磷酸化 的乙酰辅酶 A羧 化酶(p—ACC)、雷帕霉素靶蛋 白(mTOR)、磷酸化 的mTOR及其下游分子磷酸化水平改变 。结果 与正常对照组 (c组) 相 比，转染rAAV2一GFP组(GFP组)糖尿病大鼠肾脏 内p-AMPK和p-ACC蛋 白水平显著降低(均Po．05)；与rAAV2一 GFP组相 比，转染 rAAV2一AMPK—CA 的糖尿病大 鼠(CA组)体 内p-ACC表达活性显著升高，肾重 ／体重、肾小球体积、 肾小球系膜基质增生等指标有 明显改善 ，细胞外基质纤维连接蛋 白(FN)、Col4al、Co14a5mRNA表达水平 ，以及Co14“1、 信号分子 p-mTOR、磷酸化的真核延伸因子激酶 2(p-eEF2K)及磷酸化的起始因子 4E结合蛋 白1(p一4EBP1)蛋 白表达水 平显著降低 (均P0．05)。结论 rAAV2介导的AMPK—CA基因治疗可能通过增加糖尿病大 鼠肾脏 AMPK活性，抑 制 mTOR信号通路，缓解基质沉积，对糖尿病大 鼠肾脏起保护作用。 关键词 ：腺苷酸活化蛋 白激酶 ； 糖尿病 肾病 ； 雷帕霉素靶蛋 白 中图分类号 ：R692．3 DOI：10．3870／j．issn．1672-0741．2015．01．002 AM P-activatedProteinKinaseAlleviatestheAccumulationofRena]ExtraceUular M atrixinDiabeticRatsthroughInhibitingmTOR SignalingPathway LuoXia，DengLingyan，XuWenjuanetal DepartmentofLaboratoryMedicine，Ton!gjiHospital，TongjiMedicalCollege， HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective Toinvestigatetheprotectiveeffectofadenosine5’一monophosphate(AMP)activatedproteinkinase (AMPK)onthekidneysofdiabeticratsandtheinvolvedmechanism afterrecombinantadeno—associatedviruses(rAAVs)en