斑点杂交法测定Vero细胞DNA残留量的探针选择.pdfVIP

药物分析杂志ChinJPharmAnal2008，28(11) 斑点杂交法测定 Vero细胞 DNA残留量的探针选择 李加，唐建蓉 ，刘景华，曲小肃，董关木 (中国药品生物制品检定所 北京 100050) 摘要 目的：为精确检测以Vero细胞为基质的生物制品中宿主细胞残余DNA含量。方法 ：将提取的Veto细胞DNA分别用不 同时间的超声波和Hindm内切酶进行断链处理，电泳和序列分析并确定DNA片段长度，地高辛标记后制备成检测探引，‘测定 已知的不同浓度的样品DNA和疫苗中DNA残留量。结果：Hind~内切酶处理断链后产牛 172bp、344bp、516bp、688bp不同 长度的DNA，并选取 172bp长度的DNA片断和超声波处理30s的DNA长度为500～750bp的DNA片断作为检测用探针。结 论：两种方法处理的DNA探针检测DNA的灵敏度可达 0．1Pg，重复性均较好 ，超声波处理的探针特异性优于酶切探针，并能 成功的应用于疫苗产品中残余宿主细胞 DNA的检测。 关键词：疫苗；Vero细胞；DNA；探针 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2008)11—1892—04 Theprobeselection inVerocellsDNA residue detection byspothybridization LIJla，TANGJian—tong，LIUJing—hua，QUXiao—SU，DONGGuan—IllU (NatinnalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts，Beijing 100050，China) Abstract Objective：InordertoaecuratlydetecttheamountsofresiduehostcellsDNAinbiologicalsandvaccine whicharederivedfrom Verocells．M ethods：Thefollowingmethodswereestablished．TheVerocellsDNA chain werebreakdownbyultrasonicwavesorHindm incisionenzyme．ThenthelengthofDNAfragementsweretested withagaroseelectrophoresisand／orsequenceanalysis．TheseDNAfragmentswereprobesthatwereconjugatedwith DigoxintodetectVerocellsDNA．Therefore，theDNA ofsampleswithdifferentconcentrationsandtheamountsof residueDNA invaccinecanbedetected．Results：TheresultsshowthattheDNA fragmentslengthwhichweretrea． tedbyHind111incision enzymeare172bp，344bp，516bp，688bprespectivlyand500—750bpbyultrasonic wavestreatmentfor30seconds．The172bpfragmentand500—750bp productsareselectedastheprobesofthe test．Conclusion：Thesensibilitiescanreachto0．1Pgandthereproducibilityiswel1．Thespecificityofprobewas treatedwithultrasonicwavesisbetterthanthattheonewithenzymetreatment．Thesetwoprobescansuccessfully detectedresiduehostVetocellsDNA inbiologicalsandvaccine． Keyword：vaccine；Verocells；DNA；Probe Vero细胞是