乙型肝炎分子生物学检验方法的应用及质量控制.pdfVIP

·检验与临床· 乙型肝炎分子生物学检验方法的应用及质量控制 张蕾周晶珠王立 (大连市第五人民医院检验科，大连l16029) 【摘要】乙型肝炎病毒检验主要是ELISA法，其分子生物学检验方法有普通的链式酶聚合法反应法和荧光定量PCR法，尤 其是荧光定量PCR法由于具有准确、快速、灵敏、定量的优点，是目前最为理想的乙肝病毒检验方法。在乙型肝炎病毒分子 生物学检验中。特异性、重复性、灵敏度及样品制备方法等是乙肝病毒检验质量控制中的关键。 【关键词】乙型肝炎；分子生物学检验；荧光定量PCR法；质量控制 【中图分类号1R446 【文献标识码】A 【文章编号11673—9701(2009)14—98—02 乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，世界卫生组织 原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一 (WHO)估计，本病每年造成100万人死亡【I】。慢性乙型肝炎是条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性一 HBV感染的一种严重后果。我国在世界上属于乙型肝炎病毒感 退火一延伸i过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这 染的高发区，目前全国约有1．3亿人是乙型肝炎病毒携带者，慢 种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～ 性肝炎病人约有2300万。 每年我国在病毒性肝炎的直接治疗方面费用约有500亿元 (不包括保健品费用、影响学习、就业和工作等造成的间接损 果直接反映HBV病毒的复制程度，为临床提供了从分子水平 失)。对乙型肝炎病毒高效、准确的检测在其预防和治疗方面具 对病原体进行诊断的依据，但常规PCR不能进行准确的基因 有重要意义。 定量、重复性差、操作复杂和扩增产物污染所致的假阳性问题 以及威胁操作者的强致癌物溴化乙锭的使用，使其应用受到 1传统的乙肝检验法 很大限制。 2．2荧光定量PCR(Fluorescent 长期以来乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖丙氨酸氨基转 quantitation 移酶(ALT)、f-I冬氨酸氨基转移酶(AST)为主的肝功能和血清中 的免疫标志物，乙肝病毒的血清免疫学标记物丰要有3对：(1)性引物，随着PCR扩增荧光能量发生转移，荧光强度减弱，经 HBsAg与抗一Hbs；(2)HBeAg与抗一Hbe；(3)HBcAg与抗一HBc； 即待测标本中HBV—DNA拷贝数有关。从而达到定量目的。 常用E1．ISA法检测。ELISA检测法能检测HBV的表达产物及其 抗体应答系统，反映人体感染病毒后的免疫反应状态，也间接反 映了乙肝病毒的复制情况。ELISA检测法具有简单、方便、快速得以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内HBV的复制 的优点，但其敏感度仍有待进一步提高。近年来，国内外均有许 制水平、病程变化和治疗恢复情况等。其特异性高，灵敏度可达 多关于乙型肝炎病毒(HBV)基因突变的报道，通过对HBsAg突 变体基因表达产物的抗原性分析，显示不同突变体之间存在着 0．Ol坛，相当于2．5个乙肝病毒颗粒。 抗原性的差异。因此，用不同HBsAg酶联免疫试剂检测同一份血 该方法省去了对PCR产物的后处理，而且闭管操作，不需 清，其结果有可能截然不同，即临床上发现HBsAg指标漏检。 要PCR后处理，有效地防止了污染导致假阳性的发生，同时采 用实时检测技术，所得ct值和原始模板数量完全呈线形相关， 2 HBV的分子生物学检测 定量准确率极高。它不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于 荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增 HBV的