乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究.pdfVIP

中国癌症杂志 2014年第24卷第8期 CHINA ONCOLOGY 2O14Vo1．24No．8 581 乳腺癌耐药细胞中C—fos抗凋亡作用的 研 究 彭洪薇 师锐赞 袁向飞 。熊冬生 。魏筱华 1．南昌大学第一附属医院药学部，江西南昌330006； 2．山西医科大学药理学系，山西太原 030001； 3．中国医学科学院，北京协和医学院实验血液学国家重点实验室，天津300020 [摘要 ] 背景与目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，且患者死亡率居高不下，其中乳腺癌耐药 是导致临床化疗失败的主要原因。该课题组采用已建立的乳腺癌耐药细胞模型McF_7／ADR及其敏感株MCF一7，旨 在探讨C—fos在乳腺癌耐药细胞中的详细作用机制。方法：MTT检测上述细胞对多柔比星的敏感性，并通过实 时定量PCR(real—timePCR，RT—PCR)检测上述细胞中mdr一1及c—fos的mRNA表达情况；3jxmoi多柔比星分别处理 MCF一7细胞12、24、36h后采用RT-PCR检测细胞中C—fosmRNA的表达，以监测化疗药物处理过程中乳腺癌细胞 c—fos的表达变化过程；构建相应载体得到了c—fos稳定干扰细胞株及其对照细胞株：MCF一7／ADR／s卜fos一8B、 MCF一7／ADR／si-fos一3D和MCF一7／ADR／siNC，采用MTT检测干扰c—fos后对5一FU及顺铂的敏感性变化；流式细胞术 检测上述药物及y射线照射处理后细胞凋亡的情况；罗丹明123检测乳腺癌耐药细胞的外排能力；RT—PCR及蛋 白质印迹法 (Westernblot)分别检~Jle-fos干扰后，凋亡相关基因bax、bc1．2、puma、p53及mdr-1等的表达。 结果：与敏感细胞MCF一7相比，MCF一7／ADR细胞中c—fos及mdr一1的表达显著升高，且对多柔比星的耐药倍数为 敏感株的近40倍；在3gmo1多柔 比星处理MCF一7之后C—fos的表达逐渐升高，结果显示，c—fos在乳腺癌的耐药 表型形成早期即开始发挥作用；干扰C—fos后，细胞对药物 (5一Fu、顺铂)的敏感性增高，且经药物处理及y射 线照射后稳定干扰细胞株的凋亡率显著升高，说明干扰C—fos后乳腺癌耐药细胞在受到外界刺激后，更易于发 生凋亡；RT—PeR及Westernblot检测结果显示，干扰C—fos后，bax、puma、p53的表达明显升高，而bcl一2及 mdr一1的表达显著降低。结论：在乳腺癌耐药细胞MCF一7／ADR中发现，c—fos呈异常高表达，其可能通过调节乳 腺癌细胞凋亡信号通路蛋 白的变化抑制乳腺癌细胞的凋亡，促进了乳腺癌耐药表型的形成。由此，c—fos可作 为克服乳腺癌耐药治疗的一个潜在靶点用于今后的药物开发。 [关键词] 乳腺癌耐药；c-fos；细胞凋亡 DOI：10．3969~．issn．1007—3969．2014．08．004 中图分类号：R737．9 文献标志码 ：A 文章编号：1007-3639(2014)08—0581—08 Theanti-apoptoticeffectofC-fosindrug-resistantbreastcancercellsPENG Hong-wei．SHIRui- zan，YUANXiang—feij，XIONGDong—sheng，WEIXiao-hua(1．DepartmentofPharmacy,FirstAffiliated HospitalofNanchangUniversity,NanchangJiangxi330006，China；2．DepartmentofPharmacology,Shanxi MedicalUniversity,TaiyuanShanxi030001，China；3．StateKeyLaboratoryofExperimentalHematology, InstituteofH