利用ChIP-on-0chip筛选TEF-1转录因子下游靶基因并进行验证.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 利用ChIP—on—chip筛选距pJ转录因子下游靶基因并进行验证 邱海芳，王凤丽，徐学文，刘榜 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室，华中农业大学，武汉430070 关键词：转录因子；染色质免疫共沉淀；芯片；EMSA 引言 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitationassay，CHIP)技术是基于体内分析发展起来的方法，是 可用于高通量的筛选转录因子的未知DNA靶点。饱FJ是一个重要的转录因子，在肌肉特异基因的表达中起 着比较重要的作用，TEF一1的TEA结构域不但能与肌肉特异基因的M．CAT元件作用，还能与其他因子的 MADS结构域作用调节其它的肌肉基因的表达。因此筛选TEF-1在骨骼肌中的下游靶基因并揭示它们之间的 调控机制意义重大，目前尚未有此类研究的报道。 材料方法 用于染色质免疫共沉淀分析(CHIP)的骨骼肌组织样采自成年昆明小白鼠，样品保存于液氮中，以备ChIP 体功能分类及生物学通路分析(http：／／david．abcc．ncifcrf．gov)。 结果 靶基因参与了转录调控相关的细胞生理过程，具有结合活性和催化活性；靶基因主要参与了MAPK信号通路， T细胞受体信号通路和B细胞受体信号通路，这些通路均与细胞的增殖和分化等过程有关，表明所钓取的大 部分基因在肌肉的生长发育过程中发挥了重要作用。结合基因所参与的调控通路及其功能，筛选参与肌肉生 长发育的候选靶基因FOX03A进行验证，克隆FOX03A基因的启动子，并进行转录因子结合位点预测，发现 FOX03A基因受TEF一1调控。其它参与肌肉发育相关的重要的信号通路的靶基因的验证工作还在进行中。 讨论与结论 与细胞的增殖、分化、成熟和凋亡等细胞过程相关，在肌肉的生长、发育过程中发挥着重要作用，对参与这 些通路的基因的验证将揭示它们之间的调控网络以及在肌肉发育过程中的作用，意义重大。实验证明TEF-I 参与了与细胞的存活和凋亡有关的，参与胰岛素信号通路的FOX03A基因的调控，以上工作的完成为动物功 能基因组和肌肉生长发育分子调控机制的研究积累了新的基础资料，为筛选猪的候选基因和分子标记提供了 新的思路。以上工作的完成为揭示转录因子对下游靶基因的调控机制，基因在骨骼肌发育过程中的分子网络 调节中的作用以及骨骼肌发育的复杂网络调节机制开辟了新的研究思路。 致谢 一184—