乳酸脱氢酶ldhA单基因缺陷对大肠杆菌中心代谢代谢流量影响.pdfVIP

乳酸脱氢酶ldhA 单基因缺陷对大肠杆菌中心代谢的代谢流量影响 1 1 1 王峥 ，严明 ，许琳 1 （南京工业大学制药与生命科学学院, 江苏 南京 210009 ） 摘要：人类基因组计划的实施推动了大肠杆菌基因组测序的完成，为大肠杆菌突变菌株的构建和代谢研究提供了遗传 学基础。1991 年Bailey 系统阐述了代谢工程的概念后，利用代谢工程的原理研究、改进和拓展细胞的代谢特征已经 成为生物研究领域的热点之一。代谢流分析提供了代谢网络中的流量分配信息，可以了解到各个支路的流量分配关系， 有助于分析目的产物流向中的瓶颈所在，计算最大理论产量等。根据物料平衡，利用代谢反应的化学计量关系可以计 算代谢流分布通量。本文使用代谢流分析的方法考察了大肠杆菌野生型菌株W3110 以及乳酸脱氢酶（ldhA ）单基因 缺陷菌株ALS786 的中心代谢途径（central metaboli pathways ：CMPs ），来考察单基因ldhA 缺陷对大肠杆菌中心代谢 流分布的影响。对比计算结果发现ldhA 基因的缺陷使得流向乳酸生成途径的代谢通量减为0 ，乙酸生成支路的通量 减少了78.8% ，而进入TCA 途径的代谢通量相比对照菌株W3110 增加了4.6 倍。同时参照菌株W3110 的发酵液中没 有丁二酸而在ladhA 单基因缺陷菌株ALS786 的发酵液中检测到了丁二酸的积累。 关键字：大肠杆菌；代谢网络；代谢流分析；中心代谢途径；ldhA Metabolic Flux Analysis of E.coli with ldhA Single Gene Defection 1 1 1 Wang Zheng , Yan Ming , Xu Lin 1 联系人：严明 第一作者：王峥（1984-），男，硕士研究生 基金项目：国家973 项目（2003CB716000） Corresponding author: Prof. Yan Ming. E-mail: yanmin@njut.edu.cn Foundation item: supported by the 973 Program (2003CB716000). 1 （College of Life and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, Jiangsu, P.R. China ） Abstract: The carrying out of Human Genome Project gives impetus to the completion of E.coli genome sequencing, and it gives the genetic foundations about construction of E.coli mutants and its metabolic study. After Bailey who first systematically stated the concept of metabolic engineering, using metabolic engineering principles, enhancing and expanding the cells’ metabolic characteristics has became one hot spot in biotech study. Metabolic flux analysis provides the distribution flow of a metabolic network. From which, the relationship between each metabolic branch