小鼠体外成熟与体外受精卵的DNA甲基化与组蛋白修饰.pdfVIP

中困爵牧兽医学会动物繁殖学分会第十l，q崩学术研讨会论文集 小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰 张静，安晓荣，李晴，崔秀宏，刘琳，裴业春，陈永福，侯健‘ 中国农业人学牛物学院农业生物技术国家重点实验室，北京lo0094 ‘通讯作者E．mail：houjian@cau．edu．cn 摘要与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IvM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操 作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以昆明白小 鼠为研究对象，对IVM—IVF胚胎的DNA甲基化和组蛋白修饰进行了研究。初步结果如下： 实验1：比较了三种不同来源胚胎的发育能力，即：体内受精胚胎、体内成熟一体外受精胚胎、体外成熟一体外受精胚胎。结果 发育能力减弱。 核期受精卵中雌雄原核的表观遗传修饰状态。结果表明，三种不同来源的原核期受精卵在DNA甲基化和H3K9修饰上没有明显差 别。 3a，Dn— mt 3b)，组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白甲基化酶(Suv39h1，G9a)。结果显示：Dnmtl，Dnmt3a，HAT的mRNA在三种卵母细胞中均含 3b和Suv39hl在体内成熟的MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到，但在 量很高，而G9amRNA在三种卵母细胞中都没有检测到；Dnmt GV期卵和体外成熟MIl卵中可以检测到。 结论：体外成熟的卵母细胞与体内成熟的卵母细胞在表观遗传修饰酶mRNA含量上(Dnmt3b和Suv39h1)有一定差异，但在原 核期受精卵的表观遗传特征上没有差别，因此推断：体外成熟一体外受精胚胎发育能力减弱可能不是由DNA甲基化或H3K9修饰 的异常重编程造成的。但是，原核期以后的发育时期是否存在表观遗传修饰异常需要进一步研究确证． 关犍词DNA甲基化，组蛋白修饰，体外成熟，体外受精，小鼠 (上接第46l页) 3 讨论 3．1外源褪黑激素对昆明白鼠生长性能的影响 rat)的 Dawley MT能提高肉鸡的同增 饮水中加入MTl4m∥mL，12周后发现，大鼠的体重比对照组下降7％。Osei等【s】报道15m眺g MT只降低O～14d的平均日增蓖，对伞期日增重没有影响。 重。Clark和Classen【9j报道了在肉鸡饲料中添加40mg／l(g 的外源MT促进昆明白公鼠的生长，却抑制昆明白母鼠的生长。这种不一致在外MT对人的生长激素分泌影响的研 究中也被发现阁。MT对昆明白鼠生长性的能影响可能由MT作用于垂体调控生长激素的分泌造成的，而对公鼠和母 鼠生长性能影响不一致，可能是由于公鼠和母鼠不同的生理特征所引起的。同时，在本实验中发现，昆明白公鼠的体 重在皮下埋植8mgMT后一周出现一个明显的先下降又上升的趋势，这可能是因为埋植剂量大，鼠的应激造成的。 3．2外源褪黑激素对昆明白鼠繁殖性能的影响 外源MT会抑制性腺发育…～，对牛和人的研究表明，MT有生殖抑制作用，注射外源MT可明显抑制生殖机 能，减轻性腺及附属性器官的重量【131。在此次试验中我们也得到了类似的结果，皮下埋植lmg和4mg组的公鼠精子 受精能力显著低于对照组(p0．01)。这可能是由于MT对于睾酮的分泌起到抑制作用的同时促进了生精细胞的凋亡 嗍。MT还会直接影响动物的生精过程I旧，皮下埋植lmg、和4mg组公鼠睾丸组织切片的生精序列明显比对照组稀 疏。在本实验中还发现，不是所有剂量的MT都会产生抑制作用，皮下埋植8mg组的公鼠的精子受精能力和睾丸组 织切片生精序列与对照组没有显著性差异。MT处理组的母鼠排卵能力有一个减少的趋势，但没有统计学上的差异： 对卵巢组织学切片观察也没有发现明显的差