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FRAP在活细胞分子机制研究中的应用 张恚毅周涛巩焦丽张德添 (因家生物医学分析中心，=l匕京太平路27号，100850) 关键词：FRAP技术；分子标记 在生命科学研究进入分子水平的几十年里，应用多种手段已获得大量关于细胞内分子 的定性知识，基本了解了各细胞器的分子组成，找到许多在缨胞生命周期中发挥重要作用 的蛋白质，然而在生命过程中这些分子在活细胞中是“怎么样’’相互配合实现各种生物学 功能的机制问题，则是下一步要解答的重点。近年来发展的一些技术手段为解答上述问题 着各种荧光染料和荧光蛋白的开发应用、激光共聚焦显微镜及FRAP软件的诞生，FRAP 方法在近十年里的应用和研究工作迅速增多，涉及领域不断扩大。举例如下： 1．生物膜易于标记，结构相对简单，是FRAP技术应用最早并且运用较多的领域。 有关细胞膜结构组成的模型假说有多种，Kenworthy等为研究脂筏在调节膜蛋白扩散运 动中的作用，考虑了四种文献提盘的脂筏模型，链们测量了多种脂筏连接爱自和非脂筏连 接鬣白在不同温度下、胆固醇存在和缺失的条件下的动态比M和扩散系数D。结果显示， 在稳定条件下，与脂筏的连接并不成为膜蛋囱扩散运动的决定因素，因丽排除掉前诱种模 型。 2．在细胞器分子机制研究中的应用 Cole等较早地联用T 白驻留于高尔基体复合物的机制。结果发现，高尔基体膜中蛋白类似于内质网膜蛋白具有 高速侧向扩散运动，其作用强于高尔基片层之间的囊泡运输。因此提示当时的高尔基体机 3．在核蛋白研究中的应用 的组蛋自变体其有不同的定位和动力学；组蛋白和其它核蛋自在遇到不同纲胞生理条件和 刺激时，有不同的应答行为。 4。在信号转导研究中的应用 并讨论了FRAP和FLIP的优势和不足。 5．在细胞连接研究中的应用 时明显降低，为钙粘蛋白发挥的作用及机制提供了证据。 6．在细胞凋亡研究中的应用 了$70蛋白的磷酸化调节位点对Bcl．2从核到质的迁移没有影响。 7．FRAP机制研究 Sprague等总结FRAP中分子迁移机制可分为两大类： (1)单纯扩散。(2)与介质有结合作用。此时又分为两种： ①非扩散耦联，指的是分子扩散速度远快于结合作用，因此FRAP曲线会明显的分为 两个时间段，前段是由扩散系数决定的。 ②扩散耦联，指分子扩散及其与介质的结合作用是同时发生的，这样，FRAP曲线就 反映了它们的共同作用，恢复时间则决定于分子与介质的结合速率和解离速率。 8．FRAP计算模型 还有许多研究是针对特定情况下，构建相应的FRAP计算模型而展开的。由于细胞内 部分子的物理化学特性的复杂性，使其物理模型目前还难以完满的解决，而且已有的模型 计算上都比较复杂，因而FRAP在定量计算方面目前还难以统一。