HtrA1和早发型重度子痫前期相关性研究.pdfVIP

HtrAl与早发型重度子痫前期相关性研究 李扬 宗璐李雪兰 苟文丽 西安交通大学医学院第一附属医院妇产科 HtrAl是一种具有热休克蛋白性质的膜丝氨酸蛋白酶，已有实验证实HtrAl在子痫前期胎盘中过 度表达，认为HtrAl可能抑制滋养细胞的生长和增殖，并与胎盘浅着床的发生发展密切相关。美国妇 产科医师协会定义，早于34周出现高血压和蛋白尿者为早发型重度子痫前期，对母儿具有极高的潜 在风险。目前不少观点认为早发型子痫前期与晚发型子痫前期存在不同的发病机制，其发生与胎盘 浅着床相关，且胎盘形成过程较晚发型受到更多抑制。本研究旨在通过研究HtrAl在早发型，晚发型 重度子痫前期中的表达情况，对照不同孕周的正常胎盘组织的分布及表达水平，初步探讨HtrAl与早 发型重度子痫前期的相关性。 l资料与方法 1。l研究对象与分组 随机选取西安交通大学医学院第一附属医院2009年4月-2010年1月产科住院的孕妇，均以剖 官产结束妊娠，共66例。诊断标准：根据人民卫生出版社出版《妇产科学(第七版，乐杰主编)之诊 断重度子痫前期的标准。临床界定：排除其他原因所致高血压，以34周为临床界定，将小于34周发 病者作为早发型重度子痫前期组(早发型组)，晚于34周发病者作为晚发型重度子痫前期组(晚发型 组)。实验组：早发型重度子痫前期20例，晚发型重度子痈前期19例；对照组：早产组7例(均因其他 原因早产)，足月妊娠组20例。所有对象均无肝炎、结核等急慢性传染病史，无糖尿病、心脏病及肝肾 疾病史，无其他妊娠合并症及并发症。所有标本均于剖宫产术中胎盘娩出后10分钟内收集，于胎盘 母体面近脐带处避开钙化点及血管密集区，取胎盘组织约1．5cm×1．Oem×0．5cm大小，灭菌生理盐 水冲洗干净后，用纱布将水分吸干，置于4％中性多聚甲醛液中固定24h．然后常规脱水、透明、浸蜡、 包埋制做成石蜡块，4。C保存待用。 1．2实验方法 采用免疫组化sP法。HtrAl兔抗人多克隆抗体购自美国Abcam公司，即用型免疫组化试剂盒购 自北京中杉金桥生物有限公司。用PBS代替一抗作阴性对照。HtrAl一抗稀释度为l：50，4℃过夜。 二抗37。C孵育，辣根过氧化物酶37。C孵育。严格控制DAB显色时间5rain，封片。每张切片分别于 400倍下取5个典型视野，测量积分光密度(A)值。病理图像采集使用显微照相系统(奥林巴斯 Q550CW)进行灰度定量分析，由显微摄像机将切片图像输入计算机，每张切片随机选取5个不重叠高 均灰度值。平均灰度值代表HtrAl在胎盘的表达水平。阳性区表达的强弱和灰度值呈负相关，灰度 值越大则阳性表达越弱，灰度值越小则阳性表达越强。采用SPSSl7．0软件进行统计学分析。病理切 片图像平均灰度值采用SNK检验和t检验，临床资料和平均灰度的相关性采用Pearson相关分析。 2结果 HtrAl在各组的分布位置一致，主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜 一390一 细胞，在胎盘绒毛和蜕膜的间质中也有表达：定位于细胞浆。HtrAl在各组胎盘组织的表达水平有所 不同。表达水平统计分析结果如下(1)实验组中子痫前期与对照组比较，HtrAl表达明显增高，差异具 有显著性(P0．05)。(2)早产组和足月妊娠组相比，早产组的灰度值增高，与足月妊娠组有显著性 子病前期和晚发型重度子痫前期组亚组间有显著差异(PO．05)。早发型表达增加具有统计学意义。 (5)晚发型重度子痫前期HtrAl表达有所增高，和足月妊娠组的胎盘在HtrAl表达上具有显著性差 异。(PO．05)晚发型重度子痫前期HtrAl较正常足月胎盘表达增加。对早发型、晚发型子痫前期的 0．01) 3讨论 分布位置与其分泌蛋白的特性一致，提示可能涉及影响正常细胞的增殖。HtrAl蛋白在恶性黑色素 瘤，原发性卵巢肿瘤，卵巢肿瘤细胞株等中出现下调。而且过度表达机制限制了转移性黑色素瘤的增 殖，在肿瘤患者体内其基因可能存在杂合性缺失(LOH)。既往研究显示，HtrAl在人体胎盘中呈现高 表达，并且可限制滋养细胞的正常浸润能力。其限制机制主要与转化生长因子一B(transforming growth factor—beta，TGF—B)有关。 实验中各组检测到的HtrAl的分布同样主要位于绒毛滋养细胞，在胎盘绒毛小叶的合体滋养细 胞、细胞滋养细胞均检测到有表达。在胎盘绒毛和蜕膜的间质中也有表达，表达强度跟病情改变一 致。Ht