丙型肝炎病毒非结构基因NS5b地研究进展.pdfVIP

丙型肝炎病毒非结构基因NS5b的研究进展 田江红雷迎峰杨敬 第四军医大学微生物教研室陕西西安71003 它与HCV的复制及致病关系密切，其编码的蛋白对于HCV抗病毒药物及疫苗的研制等基础性研 究也有重要意义。本文就丙型肝炎病毒NS5b区有关的研究进展作了综述。 RNA依赖的RNA聚合酶 【关键词】丙型肝炎病毒：非结构基因5bl 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的传染性疾病，以血源性传播为主要途径。它 在临床上显著特征为慢性化，是慢性肝病的主要原因之一。我国大约为4000多万人，HCV感染 已经成为严重危害人类健康的公共卫生问题之一。迄今抗HCV的治疗仅限于干扰素一利巴韦林 联合使用，疗效仅约为40％，且两药物副作用大【l】，RNA聚合酶为靶标寻找特异有效的治疗 药物是近年来HCV防治的重要方向之--[2]。 HCV属于黄病毒科肝炎病毒属，为单股正链RNA病毒。HCV基因组变异大，世界范围内 K HCV主要有六个基因型，80多个亚基因型。HCV基因组全长约9．6bp，含有单一开放读框 体在宿主信号肽酶和病毒蛋白酶的共同作用下生成10个成熟蛋白或酶。其中NS5B蛋白具有RNA 依赖的RNA聚合酶活性，在病毒RNA复制中起着关键作用，是抗HCV的理想靶位。国外近年 来已经围绕NS5B蛋白设计了多种药物分子，主要分为核苷类与非核苷类，然而这些药物在临床 试验中发现易出现耐药突变株，影响了进一步应用[3】。 1 NS5B蛋白的生化性质 RNA为模板合成一条互补的负链RNA，然后再以新合成的负链RNA为模板合成正链RNA。正链 RNA病毒的RNA复制有一个特征：正链RNA的合成数量比负链多，前者是后者的10一100倍，此 即所谓的不对称复制[引。NS5B蛋白属膜结合蛋白，可以通过C端21个疏水性氨基酸在翻译 后形成一段Q螺旋与膜结合。据文献报导：全长的NS5B蛋白已经从昆虫细胞、大肠杆菌表达 体系中表达、纯化出来，并在体外具有以RNA模板合成RNA的功能，但其活性较低，而且由于 997年Lohmann、 其C末端的21个氨基酸为疏水性氨基酸，很难获得可溶性蛋白[引。1 大大提高[引，虽然21个疏水性氨基酸是病毒在体内复制时必不可少的[71。未被HCV感染的 细胞不会表达NS5B蛋白，因此可以找到一些针对NS5B的特定抑制剂，从而阻断HCV复制 而不会带来其它毒副作用，作为抗病毒药物，是目前抗HCV药物的研究热点。 第一作者：田江红，硕士研究生，E-mail：tjhmeimei@126．com． 通讯作者：杨敬，讲师，E-尬il：bcvirus@f蛐u．edu．e11． 2 NS5B蛋白的结构特点 NS5B蛋白的可溶形式的获得，促进了对其三维空间结构的研究。1999年，有三个小 组几乎同时报道了NS5B及其与rNTP结合的X射线晶体结构。与反转录酶及其他的病毒聚合 酶一样，NS5B具有典型的”指掌”结构，由’手指’、’手掌’、’大拇指”三个部分构成[引。 活性位点位于”手掌”区，可以分为A、B、C、D、E五个区，典型的GDD与DXXXXD基序高度保 守，两个基序的第一个天冬氨酰都具有羧基，能够和酶活性所必需的M92+结合。在”大拇指” 结构域有一个§一发夹结构，伸向活性中心，可以与引物或模板结合，在复制起始阶段具有重 要意义。 3NS5B的抑制剂 有关NS5B抑制剂的研究有许多，按照其化学结构和作用机理可以分为以下三类：核苷 类化合物、非核苷类化合物、焦磷酸类化合物。 (1)核苷类是底物类似物，形成竞争性抑制。在被感染细胞的细胞质中被激活生成三磷 酸形式，与NS5B结合，进入新生成链，导致链的延伸提前终止或者在延伸过程中使碱基错配 的几率增加从而增加病毒基因组突变的频率。这类抑制剂通常具有广谱的抗病毒作用，在 HIV、乙肝、疱疹病毒的治疗中都已有临床应用【9】。目前用于治疗HCV的核苷类化合物只有广 谱抗病毒药物D一利巴伟林，对于它的作用机制还存在许多争议，单独的D一利巴伟林使用，对 治疗HCV感染没有明显作用，一些人认为三磷酸D一利巴伟林通过NS5B与病毒的新生基因组 结合，使病毒聚合酶发生