乌司他丁对急性肝衰竭大鼠肝脏Bad、Bax蛋白表达影响.pdfVIP

VEGF是血管生成过程中最重要的因子。 本实验研究发现正常肝细胞中VEGF表达量很少或不表达。急性肝衰竭时，其表达量增多，6h时 DNA聚合酶6的辅助蛋白，是与细胞增殖密切相关的核内酸性蛋白质，可以在一定程度上反映肝再生 过程中细胞的增殖情况。两者表达量的一致性说明VEGF可能与肝细胞再生密切相关。翁志宏等通过 动态检测血清VEGF水平变化也同样证实了VEGF与肝细胞再生密切相关，并且认为可以预测重症肝 炎患者的预后。有报道使用VEGF和血管生成抑制剂来影响肝窦内皮细胞增殖或凋亡而调控肝细胞再 生，发现肝窦内皮细胞凋亡常伴大鼠肝再生过程停止。实验结果证实肝窦内皮细胞是部分肝切除术后 肝再生的关键性介质，而ⅦGF则对内皮细胞的增殖起了重要作用。 坏死，导致“胆酶分离”的现象。与此同时，VEGF和PCNA表达显著下降，表明肝再生受到抑制。分 析原因可能有多种，如肝血供减少、代谢紊乱、内毒素增多、抑制因子增加等等。本实验免疫组化图 片示VEGF在血管和坏死区周围表达显著，而坏死区中心表达量则明显少于周围区，造成这种分布上 的差异可能是坏死区大部分肝细胞受损或死亡，VEGF蛋白合成障碍所致，这可能也是72h时(肝坏死 最为显著)VEGF表达量下降的一个原因。VEGF表达降低阻碍了肝窦内皮细胞的增殖，并严重影响肝 细胞再生，PCNA的表达随之下降。 本研究表明VEGF在急性肝衰竭大鼠中表达与肝细胞再生程度密切相关，这可能为急性肝衰竭提 供了一种新的治疗途径，如增加内源性VEGF表达或导入外源性VEGF来改善患者预后。 参考文献(略) 乌司他丁对急性肝衰竭大鼠肝脏Bad、Bax蛋白表达的影响 温州医学院附属第一医院(325000) 张磊谷甸娜郑毅卢洁张晓华郑明华陈永平 摘要目的研究急性肝衰竭大鼠肝脏Bad、Bax蛋白的表达及乌司他丁(UTI)对其影响，探讨 UTI防治急性肝衰竭的作用机制。方法健康雄性SD大鼠66只，随机分为正常对照组、模型组和UTI 苏木素．伊红(HE)染色，光镜下观察肝组织损伤情况，采用免疫组化法检测不同时间点肝组织中 组织丙二醛(MDA)变化。结果唧干预后12h开始各时间点光镜下所见病理改变均较模型组减轻， 胞凋亡而对肝脏起保护作用。 liver 肝细胞凋亡是急性肝衰竭(acute ·152· 蛋白在细胞凋亡的胞内信号转导途径中起着重要的作用，Bad、Bax蛋白属于Bcl．2家族，具有促凋亡 作用。乌司他丁是一种广谱酶抑制剂，对多种脏器具有保护作用，本研究利用大鼠急性肝衰竭模型， 影响。 材料和方法 1．1实验动物与分组66只健康雄性sD大鼠，清洁级，体重200--250g(温州医学院实验动物中心 提供)。按随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组和药物干预组，其中正常组6只，实验组和干 预组又按不同时间点分为6，12，24，36，48h5个亚组，每组各6只。 1．2实验动物模型制备实验前12h禁食，自由饮水。D．Gal(购自南通通吕生物制品有限公司)临 1．t 京宝希迪科技有限公司)，按40gg体重腹腔注射。正常对照组在开始建模时腹腔注射等量生理盐 司提供)。 1．3取材按不同时间点取大鼠肝组织，部分于体积分数为10％的甲醛溶液中固定，石蜡包埋，制备 组织切片；另取部分肝组织立即液氮冻存，待制备组织匀浆；同时采集大鼠门静脉血，1500r／min离心 10min后留取上清。 1．4肝组织病理学观察和Bad、Bax免疫组化染色取肝组织石蜡切片行常规苏木素伊红(眦)染色， 光镜下观察组织损伤情况。另取组织切片，常规脱蜡、水化后，以Bad(美国SantaCruze公司)和Bax (武汉博士德公司)多克隆兔抗鼠一抗和博士德SABC试剂盒进行免疫组化反应，操作严格按说明书 进行；最后磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，DAB显色，复染，中性树胶封片，光镜下观察。在阳性标本上以 Plus6．0图像分析系统测量肝组织平均光密度OD值(积分光 PBS代替一抗作为阴性对照。用Image—Pro 密度(IODSⅥ订)／组织面积(AreaSUM))，用以代表阳性部位蛋白表达水平。 1．5肝组织丙二醛(MDA)含量测定取冻存的肝组织进行匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定MDA， MDA试剂盒购自南