Lorglumide阻断“CCK-CCK-AR”途径抑制胰腺癌细胞MiaPaca-2生长侵袭实验研究.pdfVIP

江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 结果 59％(41／88)，正常胰腺组织分别为18．18％(2／I 0．018，差异具有统计学意义，且两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(分别P1=0．019， 016，PO．05)。 讨论 核因子一KB(Nuclear 长、分化与凋亡、肿瘤形成与转移、胚胎发育及炎症反应有关的基因表达。NF—KB家族通常包括五个 成无活性的复合物，在细胞质中呈静息状态，一旦受到活化信号刺激，IKK能使IzBs家族某些特定位点 构域，使NF—KB人核并结合于特定基因的激活区，激活特定基因转录而使相应的蛋白质合成增加。许 多报道表明NF—KB成员与肿瘤发生、发展有关。通过组织芯片技术和免疫组化方法检测显示胰腺癌 中NF—KB／p65、IKKB的阳性表达显著高于正常胰腺组织，且阳性表达与临床分期、淋巴结转移相关， 提示NF—KB信号转导通路在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用，它的组成性激活是胰腺癌发生发展 是影响患者生存期的独立预后因素，因而利用组织芯片和免疫组化方法检测NF—KB信号通路中相关 蛋白，这不仅为实现胰腺癌的早期诊断及判断患者预后提供了依据，同时在胰腺癌基因治疗方面也具有 重要的临床指导意义，NF—KB在胰腺癌中所起到的这些作用使得它有希望成为治疗的靶点。 胰腺癌细胞MiaPaca一2生长侵袭的实验研究 周 进张子祥朱兴国 赵华朱东明 周健李德春 苏州大学附属第一医院普外科(215006) 新近研究表明，胰腺癌细胞表面往往过度表达一些受体如表皮生长因子(EGF)、转化生长因子 级联效应，引发肿瘤生物学特性的变化。本实验旨在观察低分化胰腺癌细胞MiaPaea一2中胆囊收缩素 一A受体CCK—AR的表达及其相关作用，探讨胆囊收缩素与胰腺癌发生发展是否存在一些相关因素。 材料与方法 Situ Lorglumide、M1，I购自Sigma公司，CoulterReagentsKit购自BeckmanCoulter公司，In DNA—Prep CellDeath BD公司，小鼠抗人MMP-2单抗购自SantaCruz公司，免疫组织化学S—P试剂盒和DAB显色试剂盒 购自福州迈新生物技术开发公司。 ·102· 江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 Bank 5min，370C 30s，循环35次。产物 TCTCTGCCTCCT3、，扩增片段长度为340bp。反应体系：94℃60s，56℃60s，720C 琼脂糖凝胶电泳，自动成像分析系统下成像，结果扫描打印，重复3次。 值，并计算48h的增殖(抑制)率，重复3次。 5．流式细胞仪细胞周期分析：根据MTT结果分别选用低、中浓度的药物干预24、48h，消化收集各组 细胞l×106个制成单细胞悬液，离心、洗涤、固定，弃上清收集沉淀加入试剂A液(PI)100止，B液lml 混匀。室温避光孵育30rain，300目尼龙网过滤上机检测细胞周期，重复3次。 先后多聚甲醛、含3％H202的甲醇室温固定、孵育、漂洗，渗透溶解液冰上孵育、漂洗、干燥，加入 胞，实验重复3次，染色结果判断标准：以细胞核出现棕褐色颗粒为阳性细胞，随机选取10个高倍视野 index)。 共记录1000个细胞，计算凋亡指数AI(apoptosis 加入250一低、中浓度的药物干预24、48h下的细胞悬液2×105个，下室加入含Fibronectin5mg／L的无 8urn微孔聚酯膜切下并用中性树脂片处理，附着于膜下表面的细胞在高倍镜下随机选取6个视野计数， 取均值，实验重复3次。 8．Western 1000，PBST洗涤3次)，待显色，适时终止，漂洗，拍照。 9．统计学方法：数据以均数±标准差()表示，采用t检验 结果 的表达，见图1。 2．噻唑蓝(Ma 2。 3．流式细胞仪