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全国稳定同位素新技术交流研讨会 氘标记氨基酸及其应用 侯静华，杜晓宁，李良君 (上海稳定性同位素工程技术中心) 摘要；氘标记的氨基酸相对于其他稳定同位素如13c、15N等标记的氨基酸要价廉经济，近年来其应用越来越广 泛。如以氨基酸同位素标记技术／细胞培养稳定同位素标记技术(AACT／SILAC)为技术平台，应用于定量蛋白质组 学研究具有样本需求量少、简单、直接、高效等特点，已逐渐成为研究差异蛋白质组的重要工具之一，并在肿瘤分 子标志研究中发挥着重要作用，对促进肿瘤等诊断及治疗具有重要意义。本文对氘标记氨基酸的制备方法作了介绍， 并对其在临床医学、生物学及化学等研究领域的应用进行了综述。 关键词。氘稳定同位素氨基酸应用 同位素标记的氨基酸是氨基酸中的普通原子被它的同位素(放射性或稳定性核素) 所代替形成的标记物。通常用来标记氨基酸的稳定同位素有2H、13C、15N、埔O等。稳 定同位素标记的氨基酸由于无放射性，几乎不存在毒性(60 kg体重的人体可以忍受30g 的氘，只有在氘含量极高时才会对人体产生极微毒性)，因此更适合于长期使用稳定性 同位素标记物的动力学研究。近年来，随着稳定性同位素多元标记、多重标记氨基酸的 合成，生产成本的降低以及GC／MS、LC／MS、NMR等多种高灵敏度检测方法的应用， 使稳定同位素标记氨基酸示踪技术越来越受到重视，在相关研究领域得到了较快发展。 氨基酸作为生命科学中极重要的化合物在生物化学研究中具有很重要的意义。氘标 记氨基酸则是对其进行研究的一种十分有用的方法。氨基酸的氘代反应可追溯至Stekol 和Hamill观察到在150℃重水中赖氨酸、精氨酸和组氨酸的部分H被D置换【¨。由于 入人或动物体内，以研究各类代谢途径。 1氘标记氨基酸的制备方法 同位素标记氨基酸的制备方法主要有化学合成法、生物合成法和同位素交换法三 类，而氘标记氨基酸更多的是采用同位素交换法制备。 1．1化学合成法 化学合成法是运用普通的化学反应原理，将原料分子中含有的同位素的反应物通过 化学合成来制备所需要的标记化合物，是目前制备简单标记化合物的常用方法。但众所 周知，除甘氨酸外，a．氨基酸均是手性化合物，有L一型和D．型光学异构体。用化学合 成法，除非采用不对称合成手段，通常得到的氨基酸都是D．L-夕f、消旋体，需要拆分才能 得到L．型或D．型光学异构体，而其拆分很麻烦，因此标记氨基酸的合成亦经常采用生 物合成法。 全国稳定同位素新技术交流研讨会 1．2生物合成法IZl 生物合成法是利用微生物、酶或植物等的生理代谢过程，引入同位素得到需要的的 标记氨基酸。此法的特点在于它的立体专一性，制导的都是通常研究工作所需的L．型异 构体。但此法中要找到合适的菌种并非易事，且分离有一定困难。 对于制备氘标记氨基酸而言，通常利用不同藻类物质在重水中生长，得到氘标记的 生物物质，经水解之后，再分离得到全氘化或部分专一性氘化的氨基酸产品。 1．3同位素交换法 同位素交换是指两种不同分子之间同一元素的同位素相互替代的过程。用这个原理 可直接引进稳定同位素，制备需要的标记化合物。其优点是方法简便，对复杂的难以制 得的前体化合物制备具有很好的实用意义。目前氨基酸的氘代多采用此法。 Schoenheimer R等【3】研究了利用D2S04发生H／D置换进行氨基酸的氘代反应，结果 得到氘代率很低的外消旋产物，并推测反应低转化率是由于氘代产物不溶于硫酸。 bars)下 强酸与氨基酸发生a氘代反应的方法，反应时间为5～lO分钟，观察到快速的a位氘代 现象且得到氘代率较高的外消旋产物。 达99％，文献【6】也采用此法对氨基酸进行Ix-H／D置换反应。反应通过两次氘代操作得以 实现(即在得到氘代产物后使用同样方法再次进行反应)，具体反应如下： O O || Il