艾迪注射液对肺癌SPC-A-1细胞的增殖抑制作用及其机制.pdfVIP

2015年 3月 中成 药 March2015 第37卷 第3期 ChineseTraditionalPatentMedicine Vo1．37 No．3 艾迪注射液对肺癌 SPC-A-1细胞的增殖抑制作用及其机制 陈 军， 武延庆， 姚 莉 (兰州大学第二医院药学部，甘肃兰J,I、I730030) 摘要：目的 研究艾迪注射液对肺癌SPC—A．1细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。方法 采用巯基罗丹明B (SRB) 法检测艾迪注射液对肺癌SPC—A一1细胞的抑制率，流式细胞术检测细胞周期和凋亡 ，Hoechst33258荧光染色法观察细 胞核形态的变化，免疫印迹法 (Westernblot)检测ERK1／2磷酸化，caspase一9及 caspase-3的表达。结果 艾迪注射 液作用24h和48h均对肺癌 SPC—A-1细胞增殖具有显著的抑制作用 (P0．0l，P0．001)；与对照组相比，艾迪注 射液作用48h后G／M期细胞比例增加 (P0．001)，G。／G，期和s期细胞比例下降 (P0．01，P0．05)，细胞凋亡 率升高 (P0．0i)；同时细胞中ERK1／2磷酸化水平降低 (P0．叭)，caspase-9及 caspase一3表达增强 (P0．05， P0．05)。结论 艾迪注射液能够通过阻滞细胞 G：／M期和诱导凋亡作用抑制肺癌SPC—A-1细胞增殖，其机制与降低 ERK1／2磷酸化水平和增加caspases-9及 caspase一3活性有关。 关键词：艾迪注射液；SPC—A-1；周期；凋亡；ERK1／2；caspase 中图分类号：R285．5 文献标志码：B 文章编号：1001—1528(2015)03-0630-04 doi：10．3969／j．issn．1001-1528．2015．03．037 艾迪注射液是 由斑蝥、人参、黄芪及刺五加提取制成 注射液处理组和对照组 ，根据文献 [8]选用艾迪注射液 的抗肿瘤中药注射液，目前已广泛用于原发性肝癌，肺癌， 质量浓度依次为 10、20、40、80、100mg／mL，每组设3个 消化道肿瘤及妇科恶性肿瘤等的治疗 _3l。体外研究显示， 复孔。取对数生长期 SPC—A-1细胞，用 0．25％的胰蛋 白酶 它对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用 ，但尚未见艾迪注 消化 ，用含 10％胎牛血清的RPMI一1460培养基稀释为单细 射液对肺癌SPC—A一1细胞作用的报道，本实验旨在观察艾 胞悬液 ，并以8×10 个 ／孔接种于 96孔细胞培养板 中。 迪注射液对肺癌 SPCA·一1细胞增殖的影响，并对其机制进 24h后艾迪注射液处理组分别加入经培养基稀释成不同质 行初步探讨。 量浓度的艾迪注射液；对照组则加入等体积的培养基。5％ 1 材料与方法 CO：，37℃孵育24h或48h后每孔加入预冷的50％TCA溶 1．1 细胞系 人肺癌SPC—A一1细胞购 自中科院细胞库 (上 液50 ，4℃固定 1h，去离子水洗涤5次，晾干；每个 海)，采用含有 10％优级胎牛血清的 RPMI一1640培养基培 孔加0．4％ SRB染色液 5O ，常温下避光染色 10—15 养，培养条件为5％CO：、37cc。 min，1％冰醋酸溶液洗涤 5次，晾干 ，加入 150 10 1．2 药品及试剂 艾迪注射液 (批贵州益佰 mmol／L的非缓冲 Tris碱溶液，振摇溶解并混匀。酶标仪 制药股份有限公司)；RPMI一1640培养基 (北京赛默飞世尔 515nm波长处测定吸光度 (OD)值并计算各组的增殖抑 生物化学制品有限公司)；巯基罗丹明B蛋白染料 (SRB， 制率。所有试验均重复4次。 美国Sigma公司)；细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒及细胞 1．4．2 流式细胞术检测 SPC-A-1细胞周期和凋亡 实验分 凋亡荧光Hoechst33258检测试剂盒购 自